Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR螢光染料,SYBR螢光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射螢光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何螢光信號(hào),從而...
胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的Hormone,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結(jié)...
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過(guò)透析。它是在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過(guò),在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清...
冷凍電鏡是什么?冷凍電鏡技術(shù)的應(yīng)用:冷凍電鏡主要用于掃描電鏡的很低溫冷凍制樣和傳輸技術(shù),英文名Cryo-SEM,利用冷凍電鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)直接觀察液體和半液體及對(duì)電子束敏感的樣品,如生物、高分子材料等。尤...
冷凍電鏡技術(shù)基本原理之三維冷凍電鏡技術(shù):樣品經(jīng)過(guò)在液氮中的冷凍固定,使得生物大分子中的H2O分子以玻璃態(tài)的形式存在,保持低溫,將樣品放入顯微鏡,高度相干的電子作為光源從上面照射下來(lái),透過(guò)樣品和附近的冰...
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔...
胎牛血清如何采取?在牛屠宰過(guò)程中,如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕,就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來(lái),在無(wú)菌條件下從子宮中取出小牛,進(jìn)行臍帶打結(jié)處理,清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟,在真空的條件...
挑選胎牛血清:Antibiotic含量,Antibiotic的使用情況,也需考慮在內(nèi)。國(guó)內(nèi)外的血清,都不對(duì)Antibiotic進(jìn)行測(cè)試(無(wú)四環(huán)素胎牛血清之外)。但相較于國(guó)內(nèi)Antibiotic的濫用,...
胎牛血清的處理方法有:熱滅活,F(xiàn)BS的常見(jiàn)處理方法是熱滅活,其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘,偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補(bǔ)體系統(tǒng)的任何成分,以及其他潛在的未知細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑。以前熱滅...
Real-time PCR鏈反應(yīng):嵌套聚合酶鏈反應(yīng):通過(guò)減少DNA非特異性擴(kuò)增的背景,提高DNA擴(kuò)增的特異性。兩組引物用于兩個(gè)連續(xù)的PCR。在個(gè)反應(yīng)中,一對(duì)引物用于產(chǎn)生DNA產(chǎn)物,除了預(yù)期的靶之外,該...
冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡:冷凍透射電鏡(Cryo-TEM)通常是在普通透射電鏡上加裝樣品冷凍設(shè)備,將樣品冷卻到液氮溫度(77K),用于觀測(cè)蛋白、生物切片等對(duì)溫度敏感的樣品。通過(guò)對(duì)樣品的冷凍,可以降低...
冷凍電鏡技術(shù)揭示生物分子細(xì)節(jié):冷凍電鏡可以通過(guò)揭示細(xì)胞里發(fā)生的生命過(guò)程細(xì)節(jié),幫助人們了解很多有意思的生物學(xué)現(xiàn)象。比如,我們吃辣椒會(huì)覺(jué)得辣,是因?yàn)槔苯防镉幸环N叫做辣椒素的小分子。辣椒素與位于舌頭神經(jīng)末梢...
胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的Hormone,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結(jié)...
膜片鉗電生理技術(shù)的樣本種類:從較早的肌細(xì)胞、神經(jīng)元和內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)展到血細(xì)胞、肝細(xì)胞、耳蝸毛細(xì)胞、胃壁細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、精母細(xì)胞等多種細(xì)胞;從急性分散細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)展到組織片乃至整體...
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的實(shí)驗(yàn)流程:(1)仔細(xì)檢查實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)各儀器間的線路連接。(2)依次打開(kāi)各儀器的電源開(kāi)關(guān)和實(shí)驗(yàn)軟件,檢查各參數(shù)的初始設(shè)置。(3)將樣品置于倒置顯微鏡的載物臺(tái)上。(4)電極安裝。(5)...
引物的設(shè)計(jì)對(duì)于這個(gè)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要,因?yàn)镽eal-time PCR的檢測(cè)靈敏度比較高,所以相應(yīng)的對(duì)引物設(shè)計(jì)的要求就很高。普通的要求規(guī)則大家都知道,還有幾點(diǎn)必須注意:1,引物的錯(cuò)配率(引物錯(cuò)配形成引物二聚體...
Real-time PCR:1.DNA或RNA的定量分析:Real-time PCR包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè),轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè),RNAi基因失活率的檢測(cè)等;2.基因表達(dá)差異分析:例...
電壓鉗與膜片鉗有什么區(qū)別?電壓鉗技術(shù)是通過(guò)向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流,抵消離子通道開(kāi)放時(shí)所產(chǎn)生的離子流,從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反,因此它可以反映離子流...
聚合酶鏈反應(yīng)注意事項(xiàng):在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在總RNA的提取過(guò)程中,注意避免mRNA的斷裂;為了防止非特異性擴(kuò)增,必須設(shè)陰性對(duì)照;內(nèi)參的設(shè)定主要為了用于靶RNA的定量。常...
胎牛血清:胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)超過(guò)半個(gè)世紀(jì)了,20世紀(jì)50年代末TheodorePuck在細(xì)胞和組織培養(yǎng)中初次加入胎牛血清(FBS)來(lái)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)。后來(lái)人們發(fā)現(xiàn),由于胎牛未進(jìn)食過(guò)母乳,所以IgG的...
冷凍電鏡技術(shù)是在20世紀(jì)70年代提出的,早在20世紀(jì)70年代科學(xué)家們就利用冷凍電鏡研究病毒分子的結(jié)構(gòu),頭次提出了冷凍電鏡技術(shù)的原理、方法以及流程的概念。冷凍電鏡的發(fā)展:冷凍電鏡到底是什么?從上世紀(jì)70...
膜片鉗操作實(shí)驗(yàn):標(biāo)本制備根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細(xì)胞組織,如心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞等,現(xiàn)在幾乎可對(duì)各種細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗的研究。對(duì)所采用的細(xì)胞,必須滿足實(shí)驗(yàn)要求,一般多采用酶解分離法,也可采用...
膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù)。由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)...
冷凍電鏡技術(shù)的應(yīng)用場(chǎng)景:冷凍電鏡主要應(yīng)用在結(jié)構(gòu)生物學(xué)和材料科學(xué)當(dāng)中,如在2020戴口罩戴口罩中研究人員通過(guò)冷凍電鏡技術(shù)在解析病毒結(jié)構(gòu)、推測(cè)其侵染人體細(xì)胞的路徑等傳播原理發(fā)揮了重要作用,研究人員將戴口罩...
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.為了防止塵埃、靜電傷害機(jī)器,每天做實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時(shí),請(qǐng)先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,...
冷凍電鏡技術(shù)測(cè)定結(jié)構(gòu)的幾種方法:X射線晶體學(xué)、NMR、和冷凍電鏡技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn),將這幾種方法結(jié)合共同研究結(jié)構(gòu)與功能將使結(jié)構(gòu)生物學(xué)家對(duì)所研究的分子有更為全部的理解,而這些信息是單用任何一個(gè)方法所無(wú)法獲得...
冷凍電鏡技術(shù)的應(yīng)用情況:近年來(lái),冷凍電鏡技術(shù)在全球范圍被大眾所熟知,并且被越來(lái)越多的學(xué)術(shù)界和跨國(guó)制藥企業(yè)所采用。在藥物研發(fā)方面,多個(gè)跨國(guó)公司已經(jīng)將冷凍電鏡技術(shù)用于藥物發(fā)現(xiàn)。雖然冷凍電鏡技術(shù)屬于前沿技術(shù)...
如何區(qū)別真假胎牛血清:免疫球蛋白,國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的...
引物的設(shè)計(jì)對(duì)于這個(gè)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要,因?yàn)镽eal-time PCR的檢測(cè)靈敏度比較高,所以相應(yīng)的對(duì)引物設(shè)計(jì)的要求就很高。普通的要求規(guī)則大家都知道,還有幾點(diǎn)必須注意:1,引物的錯(cuò)配率(引物錯(cuò)配形成引物二聚體...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:1)細(xì)胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過(guò)程是完整的,故對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境干擾比較...