Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析:定量分析可以分為定量和相對定量兩種。定量指的是我們想知道某個基因在初始樣品中具體的拷貝數或濃度是多少?定量實驗必須使用已知拷貝數的標準品...
冷凍電子顯微技術主要包括單顆粒冷凍電鏡技術和冷凍電子斷層掃描技術。單顆粒冷凍電鏡技術首先捕獲大量隨機分布的同一種生物樣品的二維圖像,然后通過圖像處理算法解析其三維結構。近年來,隨著冷凍電鏡設備和計算機...
胎牛血清的生產工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清...
冷凍電鏡技術是在20世紀70年代提出的,早在20世紀70年代科學家們就利用冷凍電鏡研究病毒分子的結構,頭次提出了冷凍電鏡技術的原理、方法以及流程的概念。冷凍電鏡的發展:冷凍電鏡到底是什么?從上世紀70...
冷凍電鏡技術測定結構的幾種方法:X射線晶體學、NMR、和冷凍電鏡技術各有優缺點,將這幾種方法結合共同研究結構與功能將使結構生物學家對所研究的分子有更為全部的理解,而這些信息是單用任何一個方法所無法獲得...
聚合酶鏈式反應的循環參數:預變性,模板DNA完全變性與PCR酶的完全對PCR能否成功至關重要,建議加熱時間參考試劑說明書,一般未修飾的Taq酶時間為兩分鐘。變性步驟,循環中一般95℃,30秒足以使各種...
膜片鉗又稱單通道電流記錄技術,用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),又稱巨阻封接,被孤立的小膜片面積為μm量級,內中只有少數離子通道。然后對該膜片實行電壓...
冷凍電鏡技術原理之單顆粒技術:對分散分布的生物大分子分別成像,基于分子結構同一性的假設,對多個圖像進行統計分析,并通過對正、加和平均等圖像操作手段提高信噪比,進一步確認二維圖像之間的空間投影關系后經過...
很好的胎牛血清對細胞成長的作用:提供細胞生長所需的天然或天然的生長因子。提供天然的結合蛋白,能識別氨基酸、脂質、金屬離子和等,能結合并調節它們的活性。已知清蛋白即具有上述功能,并對細胞代謝、生物合成、...
多數細胞培養中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,熱滅活并不會改善細胞的生長,卻降低了支持細胞生長的能力。即使在少數有促進的情況下,其促進的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導致的沉淀常常被認為...
很好的胎牛血清:免疫球蛋白,國產血清的只是定性檢測,結果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能完全體現出的時的牛齡情況,國產血清,基本都是新生牛的,血清中容易產生IgM,IgG的含量...
國際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,不會產生沉淀,同時能縮短血清融化時間。關于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體,如果針對補體滅活的話,就不需要。其他...
膜片鉗記錄的幾種形式:內面向外膜片(inside-out patch) 高阻封接形成后,在將微管電極輕輕提起,使其與細胞分離,電極端形成密封小泡,在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,小泡破裂再回到溶液中就得到“...
膜片鉗實驗系統:根據不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統,但有若干共同的基本部件,包括機械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設備架)、光學部分(顯微鏡、視頻監視器、單色光系統)、電子部件(膜片鉗放...
很好的胎牛血清:免疫球蛋白,國產血清的只是定性檢測,結果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能完全體現出的時的牛齡情況,國產血清,基本都是新生牛的,血清中容易產生IgM,IgG的含量...
一種提高膜片鉗實驗效率的方法與流程:膜片鉗技術是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。這項技術在可興...
胎牛血清是細胞培養重要的培養基且不可替代,它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發育因子,非常適合各種細胞的培養。因此,如何在使用過程中保護這些因子的...
熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化...
添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養液,因為如果培養液有沉淀的存在,會使得其中培養的細胞產生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質,總之出現這樣的情況會極其不利于細胞的正常生...
序列標簽站點是一個過程,其中PCR被用作基因組的特定片段存在于特定克隆中的指示物。人類基因組計劃發現這一應用對于繪制他們測序的粘粒克隆以及協調不同實驗室的結果至關重要。聚合酶鏈反應的一個令人興奮的應用...
聚合酶鏈反應:等位基因特異性聚合酶鏈反應:基于單核苷酸變異的診斷或克隆技術(snv不要與 SNPs 混淆)(患者的單堿基差異)。它需要事先知道DNA序列,包括等位基因之間的差異,并使用3’端包含SNV...
那么如何保障胎牛血清的品質呢:內有毒的,內有毒的含量越低的血清,胎牛血清級別就越高:內有毒的≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;10EU/ml<內有毒的≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清...
合格的胎牛血清都需要經過嚴格的多重質檢和驗證,這里需要特別關注胎牛血清的相關質量合格證明,不但不能含有有害微生物,如細菌、菌類、支原體、病毒等,同時也必須通過了各種性能測試實驗。通過驗證細胞的形態、增...
PCR的反應條件:dNTP濃度過高會加快反應速度,但同時還可以增加堿基的錯誤摻入率。引物濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增。TaqDNA聚合酶濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增,低則合成產物量減少...
購買回來的血清都是冰凍狀態,使用時需要融化,融化過程在溫度較低的狀態下慢慢進行,待溶解完成,我們觀察到的胎牛血清會表現出黃色或紅色。并不是越紅越好,也不是越黃越好,淡黃色到淡紅色才是比較正常的顏色范圍...
絕大多數聚合酶鏈反應方法依賴于熱循環。熱循環將反應物暴露于加熱和冷卻的重復循環中,以允許不同的溫度依賴性反應——具體地說,脫氧核糖核酸融化和酶-驅動DNA復制。聚合酶鏈反應使用兩種主要試劑-引物(引物...
胎牛血清的整個生產流程可以分為原料采集,原料加工以及冷鏈運輸。原料采集作為胎牛血清整個生產流程的第一步也是關鍵的一步,對產品的較為終質量起了決定性的影響。采集過程一般要求在各個血源地相關部門認證的農場...
在體光纖成像記錄應用:1、在體光纖成像記錄通過光學記錄特定細胞類型在自然狀態下的神經活動;2、實時觀測動物在進行復雜行為時的神經投射活動;3、闡明特殊的神經環路在動物行為中的作用;4、通過直接觀測和投...
序列標簽站點是一個過程,其中PCR被用作基因組的特定片段存在于特定克隆中的指示物。人類基因組計劃發現這一應用對于繪制他們測序的粘粒克隆以及協調不同實驗室的結果至關重要。聚合酶鏈反應的一個令人興奮的應用...
現在有些PCR因為擴增區很短,即使Taq酶活性不是很好也能在很短的時間內復制完成,因此可以改為兩步法,即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行,以減少一次升降溫過程,提高了反應速度。檢測:PCR反應擴增...