固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基的過濾澄清,液體培養(yǎng)基必須一定澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達(dá)到此項要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi),裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個雞蛋的蛋白,強(qiáng)力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養(yǎng)基的分裝,培養(yǎng)基的分裝,應(yīng)按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。培養(yǎng)基制備器使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。北京培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:正確制備培養(yǎng)基時微生物檢驗(yàn)的較基礎(chǔ)步驟之一。使用脫水培養(yǎng)基和其他成分,尤其是含有有毒物質(zhì)(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應(yīng)遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。培養(yǎng)基的不正確制備會導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時,應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關(guān)數(shù)據(jù),如質(zhì)量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養(yǎng)基時,應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制,記錄所有細(xì)節(jié)信息,如;培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實(shí)施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便潮源。北京培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。
在制備培養(yǎng)基時,通常要考慮以下因素:1.緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。2.滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過測定滲透壓防止3.粘度培養(yǎng)基的粘度主要受血清含量的影響,在多數(shù)情況下,對細(xì)胞生長沒有什么影響。在攪拌條件下,用羧甲基纖維素增加培養(yǎng)基的粘度,可減輕細(xì)胞損害。這對在低血清濃度或無血清下條件下培養(yǎng)細(xì)胞顯得尤為重要。
什么是細(xì)胞培養(yǎng):細(xì)胞培養(yǎng)是指從動物或植物中提取細(xì)胞,然后在人工環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)以進(jìn)行科學(xué)研究。較早的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是在100多年前開發(fā)的,為科學(xué)的巨大突破做出了貢獻(xiàn)。如今,它已成為全世界實(shí)驗(yàn)室用于研究細(xì)胞的生理學(xué)、生物化學(xué)、疾病潛在機(jī)制以及藥物和有毒化合物的作用的基本工具。它也可用于在藥物篩選和大規(guī)模制造生物化合物,諸如疫苗和治病性蛋白質(zhì)。貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置1天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。培養(yǎng)基制備器必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽。
培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:1.水:除特定要求,實(shí)驗(yàn)室用水的電導(dǎo)率在25℃下應(yīng)不高于25uS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4MΩcm)。微生物污染應(yīng)不超過103CFU/mL,較好低于102CFU/mL。應(yīng)根GB/T5750.12或其他有效方法,定期檢驗(yàn)微生物的污染。2.稱量和復(fù)水:稱量所需量的脫水培養(yǎng)基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)后再加水至所需的量。3.溶解和分裝:脫水培養(yǎng)基加水后適當(dāng)加熱,并不攪拌使其快速溶解,必要時,重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱溶解前應(yīng)浸泡幾分鐘。培養(yǎng)基制備器應(yīng)存放于冷暗處,較好能放于普通冰箱內(nèi)。北京培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。北京培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備的九個步驟關(guān)注要點(diǎn):步驟一:稱取數(shù)量:用1/100的電子天平稱出培養(yǎng)基所需的藥物。首先參照配方計算出配制相應(yīng)培養(yǎng)基需要各成分的數(shù)量,然后用電子天平準(zhǔn)確稱取重量。步驟二:培養(yǎng)基溶化:將培養(yǎng)基納入燒杯容器中,加小適量的水,緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養(yǎng)基中不含瓊脂,則不需要對培養(yǎng)基加熱;相反含有瓊脂,就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。步驟三:調(diào)培養(yǎng)基pH:雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì),可以盡量使培養(yǎng)基的pH值保持在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi),但如果配制的培養(yǎng)基不能要求,則必須進(jìn)行必要的調(diào)整。如果您有校準(zhǔn)過的pH計,則可以使用pH計。步驟四:培養(yǎng)基過濾:如果對配制的培養(yǎng)基沒有特殊要求,這一步可以省略。步驟五:培養(yǎng)基分裝:準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基根據(jù)用途不同分為燒瓶、試管等容器,分裝試管量大采用自動分液器,分裝試管量小,可以用漏斗分液。確定這批培養(yǎng)基的較終pH值。步驟六:培養(yǎng)基滅菌處理:分裝完成的培養(yǎng)基應(yīng)馬上滅菌。北京培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器