作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過(guò)敏反應(yīng)、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發(fā)揮作用。在天然條件和復(fù)雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫(yī)學(xué)和研究中具有重要價(jià)值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并簡(jiǎn)化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個(gè)顯著結(jié)構(gòu)差異是鉸鏈區(qū)域。與IgA2相比,IgA1具有更長(zhǎng)的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區(qū)域。IgASAPSub1的消化位點(diǎn)位于該擴(kuò)展區(qū)域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區(qū)域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對(duì)消化具有抗性。可用于如單價(jià)結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對(duì)Fc糖基化等。青海FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
Genovis除了提供IdeS酶以外,還提供很多種特異性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在鉸鏈正上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人 IgG1,產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質(zhì)池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性,不需要任何還原劑或輔助因子。因此,與許多其他常用的蛋白酶相比,F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來(lái)避免過(guò)度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶,例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結(jié)構(gòu)(HOS)的結(jié)晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價(jià)結(jié)合研究和完整的Fc聚糖分析。GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)FabRICATOR MagIC磁珠含有Ides固定化酶專為自動(dòng)化平臺(tái)(振動(dòng)臺(tái))而設(shè)計(jì)。
與IdeS不同,Romiplostim 由四個(gè)相同的血小板生成素 (TPO) 受體結(jié)合肽和一個(gè) Fc 片段組成,通過(guò)柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過(guò)夜,或用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)并在 37°C 下過(guò)夜消化該蛋白質(zhì)。 鏈間二硫鍵被還原,以便于通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行以下分析。與度拉糖肽的觀察結(jié)果類似,用固定化酶消化產(chǎn)生均質(zhì)的 Fc/2,剩下一個(gè)連接子殘基,此處為甘氨酸殘基。這有助于識(shí)別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時(shí)得到 Fc/2,剩余 4 個(gè)甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個(gè) TPO 肽連接。另一方面,這使得研究 Fc/2 和第yi個(gè)肽之間的連接區(qū)域成為可能,而不會(huì)受到第二個(gè)肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過(guò)夜消化產(chǎn)生 2 個(gè) Fc/2 變體,分別剩下 4 個(gè)和 1 個(gè)甘氨酸殘基。根據(jù)消化時(shí)間的不同,使用凍干產(chǎn)物釋放的肽以五或七種變體存在,接頭中殘留的甘氨酸殘基數(shù)量不同,而使用固定化產(chǎn)物釋放的肽以四種變體存在。
IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1,而 IgASAP Sub1+2 同時(shí)消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段,使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過(guò)與 GingisKHAN 孵育,然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化,在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中,F(xiàn)ab很容易通過(guò)降低pH洗脫。使用該試劑盒,可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。 有助于監(jiān)測(cè)多種CQA,例如糖基化、氧化和C端賴氨酸剪切。
Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR(IdeS),為客戶提供了許多選擇,以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開(kāi)發(fā)的目的,并隨時(shí)準(zhǔn)備使用,只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應(yīng)用于更高的通量和自動(dòng)化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶,在隨時(shí)可用的旋轉(zhuǎn)柱中,這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶,這可能是有利的。 對(duì)于更多的制備應(yīng)用,我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒,這是IgG片段生成和純化的強(qiáng)大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱,用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的,F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵,如果片段想用于結(jié)合研究,這一點(diǎn)尤為重要,因?yàn)榻Y(jié)合效率和免疫反應(yīng)性將被保留。通過(guò)將酶偶聯(lián)到樹脂上,可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率,從而可以進(jìn)一步加速反應(yīng),以獲得更完整的蛋白質(zhì)的消化。重慶FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切
獲得完整Fab和Fc抗體片段,用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) (HOS) 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。青海FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細(xì)表征和監(jiān)測(cè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性,例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開(kāi)發(fā)和穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品通常通過(guò)液相色譜質(zhì)譜 (LC-MS) 進(jìn)行分析。然而,在LC-MS之前進(jìn)行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn),Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性瓊脂糖珠上,現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體,促進(jìn)中級(jí)表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實(shí)驗(yàn)和操作時(shí)間,降低樣品處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)提高通量。青海FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)