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云南GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

來源: 發布時間:2025年03月10日

Genovis除了提供IdeS酶以外,還提供很多種特異性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1,產生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質池。它在pH值和鹽濃度范圍內具有活性,不需要任何還原劑或輔助因子。因此,與許多其他常用的蛋白酶相比,FabALACTICA不需要任何優化來避免過度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶,例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結構(HOS)的結晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價結合研究和完整的Fc聚糖分析。鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基,生成的片段可用于結晶和高階(HOS)NMR研究、結合研究等。云南GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

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在Genovis,我們的策略是幫助客戶進行中級(或亞基)分析,這是我們的工作,特別是我們的蛋白質酶切產品。完整質量和肽圖譜是蛋白質表征的常用方法,我們發現,與簡單但信息有限的完整質量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比,中級方法具有優勢。通過執行中級描述,您可以生成從完整的質量實驗中獲得的所有信息,具有額外的優勢。在對抗體進行完整質量分析時,很難明確地識別某些修飾。質譜儀器正在改進,可以更有效地分析更大的分子,但通過使用我們的SmartEnzymes,如IdeS,可以將抗體分解成更小的片段,這提高了這些實驗可以執行的分辨率,因此,增加了鑒定修飾的信心。此外,你不僅能夠更好地識別修改,而且你能夠將它們定位到蛋白質上的單個結構域,這是你在完整水平上無法做到的。海南FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切FabRICATOR 驗證試劑盒應用:簡化QC方法驗證;批次間變異性評估的理想形式;提高批量放行檢測性能的可信度。

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其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細表征和監測關鍵質量屬性,例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發和穩定性研究相關的大量樣品通常通過液相色譜質譜 (LC-MS) 進行分析。然而,在LC-MS之前進行足夠規模的樣品制備通常具有挑戰性。為了解決樣品制備的挑戰,Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性瓊脂糖珠上,現在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同時快速自動消化多種抗體,促進中級表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實驗和操作時間,降低樣品處理錯誤的風險,同時提高通量。

經過多年的經驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產品、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、美國QED、中國君研生物等。Genovis的內切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC,但降低復雜性并提高分辨率。

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與IdeS不同,為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產物,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質消化該蛋白質,該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯到樹脂上,可以增加酶與蛋白質的比率,從而可以進一步加速反應,以獲得更完整的連接子消化。此外,該酶不會存在于樣品制備中,可能會干擾樣品分析。為了進行比較,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜,或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復雜性,使用內切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖,并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明,GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結構域中的連接子,留下了接近均質的Fc/2產物,其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化,兩者都會產生幾種 Fc 產物,并附著不同數量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區域的質量屬性。此外,在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充,Fc/2 產物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子,有助于研究位于 GS 連接子的修飾。GingisKHAN用于LC-MS表征基于抗體的生物藥研究。山東GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS蛋白酶)試劑盒可消化兔 IgG。云南GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用,需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段,但非特異性酶活性需要仔細優化,以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點,可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 (HOS) 的 NMR 研究、結合研究等。在這里,我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化,用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊,因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率,在加入SDS上樣緩沖液之前,停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。云南GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

標簽: 中鹽核酸酶
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