抗體 Fc 糖基化譜是一種重要的 CQA，因為它會影響療效、和免疫原性。因此，需要從早期開發(fā)、工藝開發(fā)到質(zhì)量控制和批量放行的整個過程對Fc聚糖譜進行監(jiān)測。傳統(tǒng)的分析方法基于對游離的聚糖進行熒光標記，然后通過HILIC-HPLC或CE進行分析，這需要多步驟的樣品制備方案，這需要大量的時間和資源。使用Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb，然后使用LC-MS進行中級分析，為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的替代方法。如上所示，它很容易實現(xiàn)自動化，以提高通量并降低處理錯誤的風險。FabRICATOR （IdeS） 是一種 IgG 特異性半胱氨酸蛋白酶。黑龍江GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應用包括蛋白質(zhì)組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。黑龍江GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與FabRICATOR活性兼容。

Genovis是一家瑞典生物技術(shù)公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學術(shù)界。我們在全球范圍內(nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們。

Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法，這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進，在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析，或者在工藝開發(fā)或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時，例如克隆篩選，工藝開發(fā)和驗證以及穩(wěn)定性研究，這是非常好的。 此外，Genovis產(chǎn)品的效率、健壯性（Robust）和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作，而且，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產(chǎn)品很好地支持這種類型的工作，這也促使Genovis不斷推出新產(chǎn)品和現(xiàn)有產(chǎn)品的不同形式，以支持客戶的工作。如mAb在生產(chǎn)或儲存過程中的氧化，它可能會影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。

在Genovis，我們的策略是幫助客戶進行中級（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法，我們發(fā)現(xiàn)，與簡單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級方法具有優(yōu)勢。通過執(zhí)行中級描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實驗中獲得的所有信息，具有額外的優(yōu)勢。在對抗體進行完整質(zhì)量分析時，很難明確地識別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實驗可以執(zhí)行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識別修改，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個結(jié)構(gòu)域，這是你在完整水平上無法做到的。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成。黑龍江GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

用 Genovis的GlySERIAS Immobilized消化雙特異性 T 細胞接合器（BiTE）分子。黑龍江GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發(fā)，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質(zhì)量實驗長太多的時間內(nèi)獲得更多關(guān)于分子的信息。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結(jié)果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優(yōu)化。黑龍江GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切