Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法,這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進,在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析,或者在工藝開發或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時,例如克隆篩選,工藝開發和驗證以及穩定性研究,這是非常好的。 此外,Genovis產品的效率、健壯性(Robust)和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作,而且,也適用于受控環境中的批次放行方法。Genovis的產品很好地支持這種類型的工作,這也促使Genovis不斷推出新產品和現有產品的不同形式,以支持客戶的工作。Genovis的FabDELLO作用于人 IgG1 鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基。FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學
當你應用像肽圖這樣的方法時,你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了。一個主要的區別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個氨基酸。然而,中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優勢,因為需要分析的色譜峰要少得多,數據處理任務要簡單得多。此外,在中級實驗中,手工實驗步驟要少得多,FabALACTICA(IdeS)酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進行優化。一旦在氨基酸水平上進行了PTM表征,我們非常認為中級表征肽圖的一種補充方法,可以在更常規的基礎上應用。中級分析更適用于高通量或監測類型的方法,并可用于支持肽圖分析。FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學Genovis的FabRICATOR (IdeS) 酶已成為一種接受的快速表征單克隆抗體 (mAb) 的分析工具。
Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 (2D-NMR) 之后,可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關鍵質量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程,是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇,在海報“FabALACTICA產生純和均相的mAb亞基,促進2D-NMR波譜分析”中進行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質量信號和光譜分辨率導致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結構變化、氧化和非氧化樣品之間的差異,并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。
Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1,并在兩小時內生成均質的Fab和Fc片段(Genovis的IdeS在鉸鏈區下方的單個位點進行消化)。生成的片段可用于結晶和高階結構(HOS)的NMR研究、結合研究等。突變的鉸鏈區域是zhiliao性候選抗體的常見修飾,以降低效應器功能。這些突變可能會影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如,高度特異性的FabRICATOR(IdeS)消化效率對含有常見LALA突變的抗體產生負面影響。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基,能夠對具有突變鉸鏈區域的抗體進行流行的中級LC-MS分析。例如,用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab,在下鉸鏈區域具有LALA突變,并通過反相LC-MS進行分析。消化產生均勻的Fab和Fc片段。用20mMDTT還原片段,用于中級LC-MS分析,發現產生了均相的Fc/2、輕鏈(LC)和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩健性能。FabRICATOR (IdeS) 是一種 IgG 特異性半胱氨酸蛋白酶。
與IdeS不同,Genovis的FabULOUS(SpeB)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在來自多個不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區域消化,產生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化,產生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點是......KTHT...例如,制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結構研究。對來自多個物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區域的消化物;快速-在一小時內生成Fab和Fc片段;有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達。FabULOUS的分子量為29kDa,該酶含有His標簽。GlySERIAS酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結構域,以促進表征并增加對這些分子的理解。FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學
半胱氨酸蛋白酶,可在來自多個不同物種和亞類的 IgG 的鉸鏈區域消化,產生 Fab 和 Fc 片段。FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學
Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR(IdeS),為客戶提供了許多選擇,以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發的目的,并隨時準備使用,只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶,在隨時可用的旋轉柱中,這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶,這可能是有利的。 對于更多的制備應用,我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒,這是IgG片段生成和純化的強大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱,用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的,F(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內二硫鍵,如果片段想用于結合研究,這一點尤為重要,因為結合效率和免疫反應性將被保留。FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學