一些應用(如結合研究)具有高度靈敏度,因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此,Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供,可快速輕松地生成均質 F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),用于制備來自多種 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(對于兔 IgG,請咨詢),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 。 為了生成和純化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗,并通過 SDS-page 進行分析。首先,在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘,然后進行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F(ab')2 片段,并通過降低 pH 值,然后立即調整回中性 pH 值,一步洗脫結合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險,并提高通量。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學
與IdeS不同,Genovis的GingisREX(RgpB)是一種精氨酸特異性蛋白酶,可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質,包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化;在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化;產生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶,可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基,包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比,可生成更長的肽,胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇,以實現替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性,通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內具有活性,它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶,在隨時可用的離心柱中,這可以大限度地減少在樣品中殘留的酶。
經過多年的經驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產品、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、美國QED、中國君研生物等。
與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,產生完整且均質的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在1000個單位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。剩下一個連接子殘基(甘氨酸殘基),這有助于識別位于Fc區域的修飾。
為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR(IdeS)。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優勢是速度。在大多數IgG上,您可以在短短30分鐘內生成F(ab’)2和Fc/2片段,這一速度簡化了方法開發,并允許快速有效的中層表征,使客戶能夠在不比做完整質量實驗長太多的時間內獲得更多關于分子的信息。Genovis發現更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容(更多信息)。Genovis已經測試了PBS和150mM醋酸銨,pH7,結果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而,緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC(IdeS)色譜柱上的保留,并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優化。GingisREX與胰蛋白酶消化相比,可生成更長的肽。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
例如氧化、糖基化等翻譯后修飾,可以用IdeS酶。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學
與IdeS不同,Genovis的GingisKHAN(Kgp)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個位點(KSCDK/THTCPPC)消化人IgG1,產生完整且均質的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點是人IgG1三維結構的結果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性,并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑(2mM半胱氨酸)與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物,研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應,并鑒定翻譯后修飾。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學