T4UvsX重組酶的保存和純化是實驗室工作流程中的重要環節,確保了酶的穩定性和活性。以下是根據搜索結果提供的信息:保存條件:-T4UvsX重組酶通常在-20°C的條件下保存,可以保持3年的有效期。-某些產品說明中提到,該制品不含甘油,可用于建立凍干體系,這可能對長期保存和運輸有額外的好處。-建議避免反復凍融,因為這可能會影響酶的活性。純化過程:-T4UvsX重組酶是由大腸桿菌表達和純化的。這意味著科學家首先將T4噬菌體的uvsX基因克隆到適合在大腸桿菌中表達的質粒載體中。-然后將這個質粒轉化到大腸桿菌宿主細胞中,使其表達T4UvsX蛋白。-接下來,通過一系列生化步驟從大腸桿菌細胞中提取和純化T4UvsX蛋白,這些步驟可能包括細胞裂解、離心、層析等技術。注意事項:-T4UvsX重組酶的保存液中甘油含量為20%,建議單獨分裝保存,以避免反復凍融。-該酶無核酸酶活性,這表明它在催化反應時不會切割DNA鏈,而是促進DNA鏈的重組。-本產品供科研用途,不應用于臨床診斷。應用:-T4UvsX重組酶主要用于等溫擴增技術,如重組酶聚合酶擴增(RPA),這是一種快速、靈敏的核酸檢測技術。通過遵循這些保存和純化指南,研究人員可以確保T4UvsX重組酶在實驗中的有效性和可靠性。使用體外轉錄技術合成gRNA,確保gRNA的質量和純度,這對后續實驗的成功至關重要 。Cas9 Nuclease (SpCas9)
dATPSolution(脫氧腺苷三磷酸溶液)是一種常用的分子生物學試劑,通常以100mM的濃度提供。這種溶液主要用于支持DNA的合成過程,如聚合酶鏈反應(PCR)、DNA測序、填入反應、切口平移、cDNA合成和TdT加尾反應等。dATP的化學結構是2'-脫氧腺苷-5'-三磷酸,它是DNA聚合酶在DNA復制過程中用來合成DNA鏈的原料之一。在Sanger測序中,dATP與ddATP(雙脫氧腺苷三磷酸)一起使用,后者是dATP的一種衍生物,缺少3'-OH基團,用于鏈終止反應。dATP溶液應儲存在-20°C的條件下以保持其穩定性和活性,有效期通常為兩年。在生產過程中,dATP通常按照ISO9001標準進行,并在D級清潔室中進行以確保高質量和純度。HPLC確認的純度通常大于99%。dATP溶液不含qPCR、PCR、逆轉錄抑制劑,也不含DNase、RNase以及人類和大腸桿菌DNA,以避免實驗過程中的污染。Recombinant Mouse BAFFR/TNFRSF13C Protein,hFc Tag通過SDS-PAGE、Western blot、質譜等方法驗證蛋白的純度和分子量。通過活性測試評估蛋白的生物活性。
5'DNA腺苷酰化試劑盒的單步反應是一種高效的酶促反應,用于在DNA分子的5'端添加一個腺苷酸(AMP)基團。這個過程通常涉及以下步驟:1.**準備反應混合物**:-根據試劑盒說明書,將所需的5'磷酸化的單鏈DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA連接酶(或其他腺苷酰化酶)、ATP和相應的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應**:-將混合好的反應體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反應完成后,通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷酰化酶,這一步是為了防止后續的去腺苷酰化現象,確保反應的穩定性。4.**產物收集**:-由于轉化效率高,通常不需要進行凝膠純化步驟。可以通過乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產物。5.**產物應用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后續的克隆、測序、連接或其他分子生物學實驗。6.**注意事項**:-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環境中進行,以避免污染。-使用時需注意反應體系的準確性,確保底物、酶和ATP的比例適當。單步反應的優勢在于簡化了操作流程,減少了樣品處理的復雜性,并且由于高轉化效率,避免了耗時的純化步驟,從而節省了時間和成本。
PCR抑制劑是指那些在PCR反應中能夠干擾或阻礙DNA擴增的物質。這些物質通常來源于生物樣本本身或者樣本的收集和處理過程。以下是一些PCR抑制劑的特點:1.**多樣性**:PCR抑制劑可以是多種不同的化合物,包括膽酸鹽、尿素、血紅素、酚類化合物、蛋白質、多糖、植物或血液成分等。2.**來源**:它們可能來自血液(如血紅素)、尿液(如尿素)、糞便(如膽酸鹽)、植物(如多酚和多糖)、土壤(如腐殖酸)或化學物質(如酚類化合物)。3.**影響**:抑制劑可以影響DNA聚合酶的活性,干擾引物的退火,或與DNA模板發生非特異性結合,導致PCR擴增效率降低或特異性下降。4.**復雜性**:由于樣本來源的復雜性,不同的抑制劑可能需要不同的策略來克服。某些抑制劑可能通過物理方法(如離心、過濾)去除,而其他抑制劑可能需要化學處理或使用特定的PCR增強劑。5.**濃度依賴性**:抑制效果通常與抑制劑的濃度有關。在較低濃度下,某些抑制劑可能不會影響PCR,但隨著濃度增加,抑制效果會變得更加明顯。6.**特異性**:某些抑制劑可能對特定的DNA聚合酶或PCR體系有特定的影響。例如,一些抑制劑可能特別影響高GC含量的模板擴增。將MAGE-A3基因序列克隆到一個表達載體中,該載體通常包含有抗生物質抗性基因、啟動子、核糖體結合位點。
pA-Tn5轉座酶的高活性是其重要特性之一,這種高活性主要來源于以下幾個方面:1.**轉座酶突變體**:pA-Tn5轉座酶是由Tn5轉座酶的高活性突變體構成的。這種突變體相比野生型Tn5轉座酶,在體外的轉座效率顯著提高,通常提升1000倍以上。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉座酶將ProteinA與高活性Tn5轉座酶融合,這種融合不僅保留了Tn5轉座酶的高效DNA切割能力,還通過ProteinA的抗體結合特性,提高了對特定DNA序列的靶向能力。3.**轉座隨機性**:pA-Tn5轉座酶能夠在整個基因組上實現隨機的DNA切割,這為高通量測序提供了廣的覆蓋度。4.**穩定性**:高活性的pA-Tn5轉座酶在各種實驗條件下都能保持穩定,包括在不同的溫度和pH值條件下。5.**插入位點易測序**:pA-Tn5轉座酶產生的DNA片段具有明確的插入位點,這些位點容易被高通量測序技術識別和分析。6.**高效片段化**:在CUT&Tag等實驗中,pA-Tn5轉座酶能夠高效地實現目標蛋白結合DNA的片段化,為后續的測序和分析打下基礎。7.**低細胞投入量**:由于其高活性,pA-Tn5轉座酶允許從極少量的細胞中進行實驗,如單細胞水平的研究。
FnCas12a特異性識別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA(dsDNA)靶標,其PAM序列為5'-TTN-3',與Cas9的PAM序列不同。Cas9 Nuclease (SpCas9)
EB分子生物學通常指的是溴化乙錠(EthidiumBromide,EB)在分子生物學中的應用。溴化乙錠是一種常用的熒光染料,主要用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA或RNA。它通過插入核酸的堿基對之間,在紫外光照射下發出橙紅色的熒光,從而實現對核酸的可視化。溴化乙錠與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性,并且在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入一個EB分子。然而,值得注意的是,溴化乙錠具有一定的毒性,它是一種強誘變劑,具有高致病性。在實驗結束后,需要對含EB的溶液進行凈化處理,以避免對環境和人體健康造成危害。處理方法包括稀釋EB溶液至低于0.5mg/ml的濃度,然后加入化學物質進行中和,廢棄。除了作為染色劑外,溴化乙錠還可用于凝膠阻滯分析中檢測蛋白與DNA復合物,以及在凝膠電泳過程中觀察單個DNA分子。盡管EB具有這些應用,但由于其潛在的毒性和誘變性,使用時必須格外謹慎,并采取適當的安全措施。在實驗操作中,EB可以加入到凝膠中進行染色,也可以在電泳完成后加入進行染色。先加EB可以節省時間,但可能會導致背景稍微高且信號強度下降,不宜用于核酸分子大小的確定和定量。后加EB可以減少污染,圖譜更清晰,但相對耗時。Cas9 Nuclease (SpCas9)
Recombinant Human NAP-2/CXCL7
Recombinant Human Coagulation factor XI Protein
Recombinant Human CDCP1 Protein
Recombinant Human FGFR2 alpha(IIIb)(hFc Tag)
Recombinant Biotinylated Mouse TNFSF15 Protein
Recombinant Cynomolgus PVRIG Protein
Recombinant Human IFN-gamma Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse MDL-1/CLEC5A Protein
Recombinant Human Epiregulin