磁珠本身并不直接參與電泳過程,但它們可以用于電泳后的樣品處理,特別是在核酸(DNA或RNA)的提取和純化過程中。以下是使用磁珠進行電泳后樣品處理的一般步驟:1.**凝膠電泳**:-首先,將DNA或RNA樣品通過凝膠電泳進行分離。凝膠通常是瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠,根據樣品的大小和類型選擇合適的凝膠濃度和緩沖體系。2.**觀察和切割**:-電泳完成后,使用紫外線照射凝膠并使用適當的染料(如EB或SYBRGreen)對DNA或RNA進行染色,以在紫外光下觀察到DNA或RNA的條帶。3.**樣品提取**:-確定目標DNA或RNA條帶后,使用干凈的工具(如切割器或移液槍)從凝膠中切割出含有目標分子的凝膠片段。4.**磁珠準備**:-根據磁珠試劑盒的說明書,準備磁珠。通常包括磁珠的重懸和可能的表面修飾,以確保它們能夠特異性地結合目標核酸。5.**樣品與磁珠混合**:-將切割出的凝膠片段轉移到含有磁珠的溶液中,溫和地混合以促進磁珠與核酸的結合。6.**磁分離**:-將含有磁珠和核酸的混合物置于磁分離架上,利用磁場使磁珠快速聚集在管底,從而實現與溶液的分離。7.**洗滌**:-移除未結合的溶液,向磁珠上加入洗滌液,再次進行磁分離以去除雜質。牛痘DNA拓撲異構酶I應儲存在-20°C的環境中,這有助于保持其活性。在這種條件下,該酶可以保存長達3年。Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein,His-Avi Tag
pA-Tn5轉座酶是一種經過特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉座酶組成,具有以下主要應用:1.**高通量測序建庫**:pA-Tn5轉座酶可以用于快速構建用于高通量測序的DNA文庫,通過其轉座酶活性實現DNA片段化,同時加上測序接頭,簡化了傳統DNA測序建庫的多步過程。2.**CUT&Tag技術**:這是一種新興的蛋白質與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉座酶利用ProteinA與特定抗體結合,將轉座酶帶到目標蛋白附近進行DNA切割和標簽添加,實現對蛋白質結合位點的高通量測序分析。CUT&Tag技術具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復性等優點,適用于表觀遺傳學、干細胞等領域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉座酶也可用于ATAC-seq實驗,這是一種研究染色質可及性的方法,通過轉座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質DNA,然后在切割位點加上測序接頭,進行后續的測序分析。4.**轉錄組測序快速建庫**:有研究開發了基于Tn5轉座酶的轉錄組測序快速建庫方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡化了建庫過程,適用于單細胞轉錄組測序,提高了樣本的利用率和測序速度。
磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中快速、高效地回收DNA片段的實驗工具。它通常包含特異性吸附核酸分子的納米磁珠和相應的緩沖液系統,能夠去除雜質,得到高質量的DNA回收產物。這種試劑盒適用于從TAE和TBE瓊脂糖凝膠中回收大小在100bp到30kb之間的DNA片段,回收效率通常可達70%左右。使用磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的主要優勢包括:1.操作簡便快速,整個回收過程大約只需30分鐘。2.無需離心,方便實現高通量和自動化的DNA回收。3.與柱式法相比,磁珠法對于長片段DNA的回收效率更高,可高出約20%。4.純化得到的DNA可以直接用于酶切、連接、測序等后續分子生物學實驗。磁珠法的操作過程通常包括以下步驟:1.將瓊脂糖凝膠在融膠液中迅速融解,使DNA充分釋放。2.DNA與磁珠特異性結合,通過磁分離快速高效地分離磁珠與溶液。3.經過洗滌去除雜質。4.使用洗脫液將DNA從磁珠上洗脫,獲得高純度的DNA樣品。此外,一些試劑盒的說明書還會提供具體的操作步驟和所需材料的清單,包括磁珠、融膠液、洗滌液、洗脫液等組分,以及可能需要自備的無水乙醇和磁分離裝置。在使用過程中,需要注意產品的保存條件和有效期,以及操作時的個人安全防護措施。
核酸(DNA和RNA)的可視化是分子生物學實驗中的一項基本技術,用于檢測和分析核酸的存在、大小、數量和純度。以下是幾種常用的核酸可視化方法:1.**紫外線(UV)檢測**:-利用核酸分子對UV光的吸收特性,特別是在260nm波長下的吸收峰。-常用的UV檢測方法包括凝膠電泳后的凝膠成像系統,可以觀察到凝膠中DNA或RNA的條帶。2.**熒光染料染色**:-使用熒光染料,如溴化乙錠(EthidiumBromide,EB)或SYBRGreen,這些染料可以與核酸結合并在特定波長的光照射下發出熒光。-EB常用于凝膠電泳后的DNA可視化,而SYBRGreen可用于實時定量PCR(qPCR)中DNA的檢測。3.**凝膠電泳**:-通過將核酸樣品加載到凝膠中,利用電場驅動核酸分子按大小分離,然后通過上述的UV或熒光染料進行可視化。4.**紫外交聯**:-某些熒光染料,如BODIPY或Cy5,可以通過紫外交聯直接結合到核酸上,提供更高的靈敏度和特異性。5.**銀染**:-一種比EB染色更靈敏的染色方法,通過銀離子與核酸的結合,然后還原成金屬銀,形成可見的黑色或棕色條帶。6.**化學發光檢測**:-使用特定的化學發光底物,如熒光素或魯米諾,與核酸結合后,在氧化過程中產生光信號。牛痘DNA拓撲異構酶I具有特異性識別能力,能夠識別雙鏈DNA中的5'-(C/T)CCTT-3'序列。
磁珠法質粒小量抽提試劑盒通過一系列優化的步驟來確保從細菌細胞中提取高質量和高純度的質粒DNA。以下是這一過程的一般步驟:1.**細胞培養**:-首先,將含有質粒的大腸桿菌在適宜的培養基中培養至適宜密度(通常是OD600約0.6-1.2)。2.**裂解細胞**:-使用試劑盒提供的裂解液(含有SDS和可能的其他裂解成分)破壞細菌細胞壁和膜,釋放出細胞內容物。3.**吸附磁珠**:-將磁珠加入裂解后的混合物中,磁珠表面修飾有能夠特異性結合核酸的配體,使得質粒DNA吸附于磁珠表面。4.**磁分離**:-利用磁力架將吸附有質粒DNA的磁珠從溶液中分離出來,去除未結合的蛋白質和其他細胞碎片。5.**洗滌雜質**:-經過幾次洗滌步驟,使用試劑盒提供的洗滌液去除吸附在磁珠表面的蛋白質、RNA和其他雜質。6.**去除洗滌液**:-磁分離后,小心地移除洗滌液,避免磁珠干燥或吸入磁珠,以確保純度。7.**洗脫質粒**:-使用試劑盒提供的洗脫液(通常是低鹽或高pH的緩沖液)將質粒DNA從磁珠上洗脫下來。8.**收集質粒**:-洗脫后的質粒DNA通常在室溫或4°C下保存,避免多次凍融,以維持DNA的完整性。
Cas9 NLS與CRISPR/Cas9系統中的gRNA兼容,可以進行位點特異性的DNA切割 。Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein,His-Avi Tag
5'DNA腺苷酰化試劑盒中使用的酶通常被稱為腺苷酰化酶(Adenylase),這種酶能夠催化5'端磷酸化的單鏈DNA或RNA(pDNA或pRNA)轉換成5'端腺苷酰化DNA或RNA(AppDNA或AppRNA)。根據搜索結果,該酶的來源是嗜熱古細菌,在大腸桿菌中進行表達并純化而獲得。這種酶在反應中將ATP分解成AMP和PPi,然后將AMP轉移到單鏈DNA的5'磷酸基團上,形成腺苷酰化單鏈DNA,從而制備出腺苷酰化接頭(linker)。此外,一些5'DNA腺苷酰化試劑盒中使用的酶是MthRNA連接酶(例如NEB#M2611A),這種酶也用于生成高產量的5'腺苷酰化DNA,并且操作簡便,具有超過95%的效率,無需凝膠純化即可完成單步反應。MthRNA連接酶是一種已知能夠在65℃下有效工作的酶,有助于避免DNA的二級結構對腺苷酰化反應的干擾。這些酶的高效率和特異性使得5'DNA腺苷酰化試劑盒在單鏈DNA的5'端腺苷酰化修飾中非常有效,常用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆、高通量測序建庫或PCR檢測等應用中。Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein,His-Avi Tag
Recombinant Human NAP-2/CXCL7
Recombinant Human Coagulation factor XI Protein
Recombinant Human CDCP1 Protein
Recombinant Human FGFR2 alpha(IIIb)(hFc Tag)
Recombinant Biotinylated Mouse TNFSF15 Protein
Recombinant Cynomolgus PVRIG Protein
Recombinant Human IFN-gamma Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse MDL-1/CLEC5A Protein
Recombinant Human Epiregulin