NLS-Cas9Nuclease是一種重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白,它在N端和C端都添加了核定位信號(NLS),這使得它能夠更有效地進入細胞核并進行基因組編輯。這種蛋白與CRISPR/Cas9系統的引導RNA(gRNA)形成穩定的核糖核的蛋白(RNP)復合物,可以在進入細胞后立即定位到細胞核,從而誘導特定的DNA雙鏈斷裂,實現基因編輯。與傳統的mRNA或質粒系統相比,使用NLS-Cas9Nuclease不需要轉錄和翻譯過程,因此可以避免將外源DNA插入基因組的風險,這對于基因編輯尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特點包括:1.無DNA:系統不添加外部DNA,降低了插入外源DNA的風險。2.高切割效率:雙NLS確保Cas9蛋白高效進入細胞核。3.低脫靶效應:Cas9核酸酶的瞬時表達提高了切割的特異性。4.節省時間:無需轉錄和翻譯過程。這種核酸酶可以用于體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA,以及通過電穿孔或注射與特定gRNA結合時的體內基因編輯。產品的保存條件通常是在-25~-15℃,有效期為一年。使用時,可以根據推薦的反應體系進行體外DNA裂解實驗,并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效率。具體產品的詳細信息和應用指南,可以參考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的資料。將含有重組質粒的表達載體轉化到宿主細胞中,通常是大腸桿菌或其他合適的細胞系。Recombinant Mouse TSLPR Protein,His Tag
重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應用中提高藥物穩定性和靶向性的機制主要包括以下幾點:1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內的循環時間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩定性**:rHSA作為載體,可以保護藥物分子不受體內酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩定性。例如,FGF21與HSA融合后,其體外穩定性提升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩定性增加。3.**改善藥代動力學**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動力學特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內的濃度和療效。4.**增強靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學特性,如與特定受體的結合,增強藥物對特定組織或細胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結合,實現對瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內源性蛋白質,具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應,提高藥物的安全性和耐受性。Influenza HA (518-526)去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes, DUBs)可以去除泛素化蛋白上的泛素鏈,使泛素分子得以回收和再利用。
高保真Cas9變體在實際應用中的優勢主要體現在以下幾個方面:1.**降低脫靶效應**:高保真Cas9變體通過減少與非目標DNA序列的結合,從而降低了基因編輯過程中的脫靶風險。這對于減少基因編輯可能帶來的非預期效果至關重要。2.**提高特異性**:通過工程化改造,如SpCas9-HF1、eSpCas9和HypaCas9等變體,通過在DNA相互作用位點引入突變,減少了對目標DNA的非特異性識別和切割。3.**擴展PAM序列兼容性**:一些高保真Cas9變體,如xCas93.7,能夠識別多種PAM序列,從而擴展了可編輯基因組區域的范圍。4.**提高效果**:在臨床中,高保真Cas9變體可以減少由于脫靶效應引起的潛在風險,提高基因的安全性和有效性。然而,高保真Cas9變體也存在一些局限性:1.**編輯效率可能降低**:在提高特異性的同時,可能會有一定的編輯效率。一些高保真變體可能在保持特異性的同時,編輯效率有所下降。2.**結構和功能復雜性**:高保真Cas9變體的結構改造可能增加其結構和功能的復雜性,這可能對實際應用中的穩定性和可預測性帶來挑戰。3.**成本和可用性**:開發和生產高保真Cas9變體可能需要更多的研究和資源投入,這可能影響其在某些應用中的成本效益。
重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白(SpCas9)是一種用于基因組編輯的核酸酶。它是CRISPR-Cas系統的一部分,該系統是一種細菌和古菌的適應性免疫防御機制,能夠識別并切割入侵的外源核酸。Cas9蛋白在CRISPR系統中起到關鍵作用,它能夠識別特定的原間隔子相鄰基序(PAM),在引導RNA(gRNA)的引導下與目標DNA結合并進行切割。SpCas9蛋白由1053個氨基酸組成,相對較小的體積使其便于在體內遞送,因此它在多種生物中都能進行有效的基因組編輯。為了提高SpCas9的表達量和溶解度,研究人員采用了多種策略,例如使用GB1促溶標簽和多重啟動子策略,這些策略可以顯著提高蛋白的產量和活性,同時保持其功能活性不受影響。在基因編輯過程中,SpCas9與gRNA形成穩定的核糖核的蛋白(RNP)復合物,通過gRNA與基因組DNA的序列匹配來識別目標位點,并在距離NGGPAM序列3個堿基以內的位置切割DNA。為了增強SpCas9的基因組編輯效率,研究人員還開發了嵌合融合蛋白,例如與5’至3’核酸外切酶重組J(RecJ)或GFP融合的SpyCas9蛋白,這些嵌合蛋白可以顯著提高靶向基因編輯效率,同時保持較低的脫靶效應。
IdeSProtease是一種免疫球蛋白G(IgG)特異性降解酶,它能夠在IgG的鉸鏈區下方的一個特定位點進行切割,產生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過大腸桿菌(E.coli)表達系統重組表達生產的,并且經過分子改造,使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產過程中,確保IdeSProtease符合GMP(良好生產規范)標準,需要進行以下步驟:1.**分子改造**:通過分子生物學技術對IdeS進行改造,增強其穩定性和比活性。2.**大腸桿菌表達系統**:利用大腸桿菌表達系統進行IdeS的重組表達,確保無動物源性成分,減少病毒污染風險。3.**純化**:通過高度純化過程,確保IdeS的純度達到≥95%。4.**酶活定義**:1個酶活力單位定義為在37°C條件下,30分鐘內酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質量控制**:每批產品都經過嚴格的質量控制,以確保產品批間穩定性和高穩定性。6.**儲存條件**:采用適當的儲存條件,如-30℃至-10℃凍存,確保產品在有效期內保持活性和穩定性。7.**微生物學安全性檢測**:進行無菌檢測、體內有毒物質的檢測、抗生物質殘留檢測、宿主細胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測,確保產品符合微生物學安全性要求。
牛痘DNA拓撲異構酶I應儲存在-20°C的環境中,這有助于保持其活性。在這種條件下,該酶可以保存長達3年。Recombinant Mouse TSLPR Protein,His Tag
PNGaseF(肽-N-糖苷酶F,Peptide-N-glycosidaseF),也稱為N-糖酰胺酶F,是一種用于糖蛋白研究的酶,它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關鍵特性和應用:1.**作用機制**:PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈,釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應用領域**:PNGaseF在糖生物學和蛋白質組學研究中非常重要,用于分析糖蛋白的糖基化模式和結構。3.**酶的來源**:PNGaseF開始是從大腸桿菌(Escherichiacoli)中分離出來的,現在也可以通過重組DNA技術在其他宿主細胞中表達。4.**酶的純度和活性**:商業化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性,確保了在實驗中的高效性和可重復性。5.**使用條件**:PNGaseF在溫和的條件下工作,通常在pH7.5至9.0之間,溫度在37°C左右。6.**穩定性**:PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存,以保持其活性。在適當的條件下,該酶可以保持穩定和活躍。7.**樣品準備**:在使用PNGaseF之前,糖蛋白樣品需要適當準備,可能包括純化和緩沖液交換,以確保反應條件的一致性。Recombinant Mouse TSLPR Protein,His Tag
Recombinant Human NAP-2/CXCL7
Recombinant Human Coagulation factor XI Protein
Recombinant Human CDCP1 Protein
Recombinant Human FGFR2 alpha(IIIb)(hFc Tag)
Recombinant Biotinylated Mouse TNFSF15 Protein
Recombinant Cynomolgus PVRIG Protein
Recombinant Human IFN-gamma Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse MDL-1/CLEC5A Protein
Recombinant Human Epiregulin