T5核酸外切酶（T5Exonuclease）具有以下特點和技術應用：1.**降解方向**：T5核酸外切酶按照5'→3'方向降解雙鏈或單鏈DNA。2.**起始消化位置**：T5核酸外切酶既能從單鏈或雙鏈DNA的5'末端起始消化，也可以從線性或環狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化。3.**對超螺旋雙鏈DNA的作用**：T5核酸外切酶無法降解超螺旋雙鏈DNA。4.**單鏈DNA核酸內切酶活性**：T5核酸外切酶還具有單鏈DNA核酸內切酶活性。5.**應用領域**：-用于Gibson組裝，這是一種在恒溫條件下有效連接帶有多個重疊序列片段的技術。-從完全連接的環狀雙鏈DNA中去除不完全連接產物。-降解堿裂解質粒提取方法中產生的變性DNA，增加超螺旋DNA比例，提高DNA克隆和轉染效率。-降解質粒樣品中污染的線性化和切刻DNA。6.**操作條件**：推薦在37℃溫育30分鐘，之后加入EDTA至終濃度為20mM終止反應。7.**儲存條件**：-25～-15℃保存，有效期3年。8.**注意事項**：避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止本品失活。這些特點和技術應用使得T5核酸外切酶在分子生物學實驗中，尤其是在DNA克隆和基因片段組裝中，具有重要的應用價值。在泛素化過程中，首先泛素激起酶E1（Uba1或其他）在ATP的存在下激起泛素分子，形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Mouse LY6AProtein,His Tag

牛痘DNA拓撲異構酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓撲異構酶，具有以下功能和應用：1.**功能**：-牛痘DNA拓撲異構酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性，能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環狀的正或負超螺旋DNA發生解超螺旋，形成含有較少的正或負超螺旋的雙鏈環狀DNA分子。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(knotting)或解開繩結(unknotting)，聯結互補的單鏈環狀DNA成為雙鏈環狀DNA。2.**應用**：-作為一種DNA重組連接的新型工具酶，用于DNA載體和重組片段的連接、缺刻修復、接頭連接等。-適用于TOPO克隆載體的制備、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術中，DNA拓撲異構酶I同時具有限制酶和連接酶特性，其生物學功能是在復制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**：-用于DNA快速酶切流程，包括配制體系反應液、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟。4.**儲存條件**：-建議在-25～-15℃保存，有效期為3年。5.**注意事項**：-避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止酶失活。牛痘DNA拓撲異構酶I因其獨特的功能，在分子生物學研究和基因工程中扮演著重要的角色。Recombinant Mouse LY6AProtein,His TagFnCas12a在切割DNA時產生黏性末端，有助于提高同源定向修復（HDR）的效率。

在比較BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶對于復雜DNA片段擴增的適用性時，以下是一些關鍵點：1.**TaqDNA聚合酶**：-TaqDNA聚合酶因其高熱穩定性和擴增效率而被應用于常規PCR。它擴增速度為30-60秒/kb，缺乏3'→5'核酸外切酶活性，無校正功能，易產生錯配堿基。-對于結構復雜的模板，如GC含量高、有二級結構等，TaqPlus可以用于擴增，能有效地擴增10kb以下的片段。-有產品如TitaniumTaqDNA聚合酶，它是通過基因工程改造的Taq酶，缺失了5'-3'外切酶活性，具備更強大的擴增性能，適合擴增高度復雜的DNA混合物。2.**BstDNA聚合酶**：-BstDNA聚合酶具有高適溫度，能夠適應更加苛刻的擴增條件，同時消除DNA二級結構，因而能夠準確并且均勻地擴增全基因組序列。-BstDNA聚合酶大片段能夠優先擴增短片段的DNA，并且能夠確保擴增得到的DNA覆蓋了整個基因組，連貫并且無偏地擴增所有的遺傳位點。-翌圣生物HieffCanace®PlusHigh-FidelityDNAPolymerase基于PfuDNA聚合酶改造而成，其保真性是Taq酶的83倍，Pfu酶的9倍，擴增速度高達10秒/kb，擴增目的片段長達13kb，具有極強的擴增效率的模板適應性，非常適合復雜模板的高保真擴增。

ExoIII（ExonucleaseIII）和Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在DNA末端處理上的主要不同點如下：1.**作用方向**：-**ExoIII**：具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性，它從DNA鏈的3'-OH末端逐步切去單核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**：是一種5'→3'核酸外切酶，能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**底物特異性**：-**ExoIII**：適底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點產生單鏈缺口。由于對單鏈DNA無活性，因此難以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**：適底物是5'磷酸化的雙鏈DNA，對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低，不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**活性差異**：-**ExoIII**：對具有3'-突出末端(至少有4個堿基，且具有3'-末端C殘基)的DNA、單鏈DNA、硫代磷酸酯連接的核苷酸無活性。-**Lambda核酸外切酶**：對5'-OH端的切割速度比5'-P端慢約20倍；對單鏈DNA的酶切速度比雙鏈DNA慢約100倍。4.**應用場景**：-**ExoIII**：可以用于生產特定方向的單鏈DNA，將線性化DNA設計成為一端為不切割末端（3'突出端），另一端則設計為易切割末端（平端或5'突出端）。

Cre重組酶在基因編輯中的操作主要涉及以下幾個步驟：1.**識別與結合**：-Cre重組酶首先識別并分別結合兩個LoxP序列的兩個反向重復序列，形成一個二聚體。2.**四聚體形成**：-兩個二聚體互相靠近，形成由四個Cre分子與兩個LoxP位點結合形成的四聚體復合物。3.**DNA切割與交換**：-Cre重組酶在每個LoxP位點的間隔序列中引導單鏈切割，產生帶有3’端羥基的斷裂。每個LoxP位點的兩個單鏈分別被切割。切割產生的自由3’端與對側的3’端進行交換和重連，形成Holliday交叉結構。4.**分子重組與解旋**：-Holliday交叉結構通過Cre酶的作用被解旋并重組，形成新的重組產物。這個過程導致兩個LoxP位點之間的DNA序列被刪除、反轉或易位，具體效果取決于LoxP序列的排列方式（方向和位置）。5.**條件性基因編輯**：-通過建立特異性Cre小鼠，該小鼠中的Cre重組酶由特定啟動子驅動，可在特定細胞或組織或全身表達Cre重組酶。與帶有Lox位點的Flox小鼠雜交，子代中可以獲得既帶有Cre又帶有Flox基因的小鼠，實現條件性基因打靶（表達或敲除靶基因）。多泛素化的靶蛋白被26S蛋白酶體識別。26S蛋白酶體由一個20S顆粒和兩個19S調節顆粒組成。Recombinant Mouse LY6AProtein,His Tag

E1在ATP的存在下激發泛素分子，通過一個硫酯鍵將泛素的C末端甘氨酸殘基與E1酶的活性連接起來。Recombinant Mouse LY6AProtein,His Tag

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Thermophilic Geobacillus sp）DNA聚合酶I衍生的酶，缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關鍵信息：來源和特性：Bst Plus DNA Polymerase 具有更強的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性，適合用于抗污染的等溫擴增反應，如LAMP和CPA等。應用：主要應用于等溫DNA擴增，包括環介導等溫擴增（LAMP）和其他等溫擴增技術。規格：活性定義：1 U指的是在65°C下30分鐘內將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質中的酶的量。溶液成分：包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油，pH 7.5 @ 25℃。產品形式：提供的產品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)，貨號14402ES，以及凍干粉形式的產品，貨號14405ES，不含甘油。靈敏度和穩定性：Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度，低至5copies目的基因可測，且在飛克（fg）級別的模板量下也能快速達到閾值。在37°C下，該酶可以保持相對穩定的效應長達5天，并且在-20℃下可以穩定保存2年。儲存條件：建議在-25℃至-15℃下儲存，以保持產品活性，并避免反復凍融。Recombinant Mouse LY6AProtein,His Tag