在PCR實(shí)驗(yàn)中,確保引物與目標(biāo)序列的完全特異性是至關(guān)重要的,這可以通過(guò)以下幾個(gè)步驟實(shí)現(xiàn):1.**基于已知序列設(shè)計(jì)引物**:根據(jù)目標(biāo)DNA序列,使用計(jì)算機(jī)軟件(如Primer3、Snapgene等)設(shè)計(jì)出兩個(gè)互補(bǔ)的引物,以保證引物的特異性和準(zhǔn)確性。2.**引物長(zhǎng)度和Tm值**:通常選擇引物長(zhǎng)度為18-25個(gè)核苷酸,引物的Tm值(熔解溫度)通常選擇在50-60℃之間,以保證引物和目標(biāo)DNA序列的穩(wěn)定性。3.**避免與其他DNA序列的交叉反應(yīng)**:使用BLAST等計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行引物特異性檢查,確保引物只與目標(biāo)序列互補(bǔ),而不與其他非目標(biāo)序列發(fā)生雜交。4.**避免引物自身結(jié)合**:設(shè)計(jì)引物時(shí)要避免引物之間自身結(jié)合,因?yàn)檫@會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性和效率。5.**引物的3'端設(shè)計(jì)**:引物的3'端應(yīng)避免富含GC,以確保與模板序列的穩(wěn)定結(jié)合。同時(shí),避免3'端存在序列,以防止形成引物二聚體。6.**避免內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)**:設(shè)計(jì)引物時(shí),應(yīng)避免存在可能產(chǎn)生內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)的序列,以保證引物與模板序列的結(jié)合。7.**使用在線工具進(jìn)行引物特異性檢驗(yàn)**:利用Primer-BLAST等在線工具設(shè)計(jì)引物,并進(jìn)行特異性驗(yàn)證,確保引物只擴(kuò)增特定目標(biāo)序列。在糖蛋白結(jié)構(gòu)分析領(lǐng)域,Endo H 是一種重要的工具酶,通過(guò)水解糖蛋白中的特定糖苷鍵,可以將糖鏈切割下來(lái)。Recombinant Mouse BAFFR/TNFRSF13C Protein,hFc Tag
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的酶,特別是在等溫DNA擴(kuò)增技術(shù)中。以下是一些關(guān)于BstDNAPolymerase,LargeFragment的關(guān)鍵信息:1.**來(lái)源**:這種酶來(lái)源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。2.**活性**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有5'到3'的DNA聚合酶活性,并且具有鏈置換活性,這使得它能夠用于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)。3.**熱穩(wěn)定性**:由于其嗜熱特性,BstDNAPolymerase,LargeFragment能夠在較高的溫度下保持活性,通常在60-65°C。4.**應(yīng)用**:-**等溫?cái)U(kuò)增**:用于LAMP和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),這些技術(shù)不需要傳統(tǒng)的熱循環(huán)儀。-**全基因組擴(kuò)增**:用于快速擴(kuò)增少量DNA樣本,以進(jìn)行進(jìn)一步的分析。-**突變檢測(cè)**:在某些情況下,用于檢測(cè)特定基因的突變。5.**優(yōu)點(diǎn)**:-**高保真度**:與某些其他DNA聚合酶相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment具有較高的保真度。-**快速擴(kuò)增**:等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)快速產(chǎn)生大量DNA。Recombinant Human CD52 Protein,hFc Tag其作用位點(diǎn)相對(duì)局限,主要作用于高甘露糖型和部分雜合型 N - 連接糖鏈,對(duì)于復(fù)雜型 N - 連接糖鏈的作用較弱。
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術(shù)來(lái)純化質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品。它通常包括高性能納米磁珠和獨(dú)特的緩沖體系組合,通過(guò)裂解菌體后釋放的DNA,能夠有效地結(jié)合于磁珠表面,漂洗除雜后獲得高質(zhì)量的目的質(zhì)粒。以下是磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的一些主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**快速簡(jiǎn)便**:操作步驟簡(jiǎn)單,無(wú)需多次離心,整個(gè)抽提過(guò)程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。純化得到的DNA質(zhì)量高,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/230比值大于2.0。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質(zhì)粒抽提,且抽提所得的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。4.**自動(dòng)化兼容**:可整合移液法自動(dòng)化儀器和磁棒法自動(dòng)化儀器進(jìn)行高通量提取實(shí)驗(yàn)。5.**安全性高**:操作過(guò)程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,磁珠法可以減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒,且操作更為簡(jiǎn)便快捷。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調(diào)節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術(shù)從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質(zhì)量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨(dú)特的磁珠具有很強(qiáng)的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對(duì)磁場(chǎng)響應(yīng)迅速,使得提取過(guò)程既安全又便捷。3.**提取過(guò)程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結(jié)合。通過(guò)磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經(jīng)過(guò)洗滌去除雜質(zhì),用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來(lái)。4.**應(yīng)用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如PCR擴(kuò)增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測(cè)序、基因組DNA文庫(kù)構(gòu)建等。5.**操作簡(jiǎn)便**:整個(gè)抽提過(guò)程大約需要50分鐘,操作簡(jiǎn)便,無(wú)需使用有毒有害的有機(jī)試劑,如酚或氯仿,提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低。回收率通常超過(guò)80%。
CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別:1.**技術(shù)原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來(lái)進(jìn)行DNA切割。ChIC的優(yōu)勢(shì)在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過(guò)在冰上進(jìn)行簡(jiǎn)短的消化反應(yīng),在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物。2.**操作步驟和簡(jiǎn)便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問(wèn)題,如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡(jiǎn)化了操作步驟,使用磁珠固定細(xì)胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測(cè)序文庫(kù)的時(shí)間(1-2天)。3.**背景信號(hào)和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產(chǎn)生的背景信號(hào)可能較高,因?yàn)樗赡苌婕暗椒翘禺愋缘腄NA切割。
Cas9 NLS與CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的gRNA兼容,可以進(jìn)行位點(diǎn)特異性的DNA切割 。Recombinant Mouse BAFFR/TNFRSF13C Protein,hFc Tag
嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)和它的大片段(LargeFragment)是兩種在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的酶。它們的主要區(qū)別在于結(jié)構(gòu)和活性:1.**結(jié)構(gòu)**:-完整的BstDNAPolymeraseI包含一個(gè)5'→3'的核酸外切酶活性區(qū)域,而大片段是通過(guò)基因工程改造或蛋白酶處理去掉了這個(gè)外切酶活性區(qū)域的酶。因此,大片段沒(méi)有5'→3'的核酸外切酶活性,但保留了5'→3'的DNA聚合酶活性。2.**活性**:-BstDNAPolymeraseI具有5'→3'的核酸外切酶活性,這意味著它在合成DNA的同時(shí)可以“校對(duì)”錯(cuò)誤,切除不匹配的核苷酸。而大片段由于缺少外切酶活性區(qū)域,不具有這種校對(duì)能力。-大片段具有更強(qiáng)的鏈置換能力,這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)。3.**應(yīng)用**:-BstDNAPolymeraseI由于具有校對(duì)功能,可能更適合于需要高保真度的DNA合成反應(yīng)。-BstDNAPolymerase,LargeFragment由于其鏈置換能力,更適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),這些技術(shù)不需要熱循環(huán)儀,可以在恒定溫度下進(jìn)行DNA擴(kuò)增。4.**熱穩(wěn)定性**:-BstDNAPolymerase,LargeFragment通常在65°C左右的溫度下進(jìn)行反應(yīng),而BstDNAPolymeraseI可能具有更寬的反應(yīng)溫度范圍。Recombinant Mouse BAFFR/TNFRSF13C Protein,hFc Tag
Recombinant Human NAP-2/CXCL7
Recombinant Human Coagulation factor XI Protein
Recombinant Human CDCP1 Protein
Recombinant Human FGFR2 alpha(IIIb)(hFc Tag)
Recombinant Biotinylated Mouse TNFSF15 Protein
Recombinant Cynomolgus PVRIG Protein
Recombinant Human IFN-gamma Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse MDL-1/CLEC5A Protein
Recombinant Human Epiregulin