重組人血清白蛋白(rHSA),特別是通過植物表達系統生產的細胞培養級產品,以其高純度和質量一致性而受到科研和工業界的重視。以下是高純度rHSA的一些關鍵特點和意義:1.**純度標準**:高純度的rHSA通常意味著蛋白質含量達到99%以上,這通常通過高效液相色譜(HPLC)、SDS-PAGE電泳等方法進行驗證。2.**內素水平**:內素水平是衡量蛋白質純度的一個重要指標。高純度rHSA的內素水平通常非常低(例如,≤0.5EU/ml),這有助于減少細胞培養中潛在的內素污染。3.**宿主細胞蛋白(HCP)殘留**:高純度rHSA的宿主細胞蛋白殘留量非常低,這有助于減少細胞培養中外來蛋白的干擾。4.**無動物源成分**:由于rHSA是通過植物表達系統生產的,因此不含有動物源性成分,這降低了動物源性疾病傳播的風險。5.**批次一致性**:高純度rHSA的生產過程通常在嚴格控制的條件下進行,確保不同批次之間的質量一致性,這對于科學研究和商業生產至關重要。6.**應用廣**:高純度rHSA在細胞培養、生物制藥、藥物載體、疫苗開發等領域有著廣的應用。7.**安全性**:高純度rHSA的生產過程不涉及動物源材料,因此可以降低血源性疾病的風險,提高產品的安全性。將MAGE-A3基因序列克隆到一個表達載體中,該載體通常包含有抗生物質抗性基因、啟動子、核糖體結合位點。Recombinant Human FGFR2 beta (IIIc) Protein,His Tag
在ADCs(抗體藥物偶聯物)的制備過程中,確保藥物的穩定性和生物活性是至關重要的。以下是幾個關鍵步驟和技術要點:1.**藥物抗體比(DAR)的控制**:DAR是影響ADC穩定性的關鍵因素。通過控制DAR和藥物負荷分布,可以促進ADC的穩定性。DAR值在2-4之間通常被認為是好的選擇,但后面的DAR值需要通過穩定性試驗、體內有效性和藥代動力學共同決定。2.**連接子的選擇**:連接子在化學過程中、血漿循環以及產品儲存過程中的穩定性非常關鍵。連接子的選擇決定了抗體藥物的DAR,并且連接子的穩定性影響著ADC的整體穩定性。3.**有效載荷的選擇**:有效載荷對ADC的毒性和生物活性至關重要。選擇具有高度細胞毒性且能在靶細胞內有效釋放的有效載荷是必要的。同時,有效載荷及其代謝形式決定了ADC分子的毒性。4.**制劑配方的優化**:ADC的制劑配方需要考慮抗體、連接子和有效載荷的穩定性和特性。pH值、緩沖液、離子強度、表面活性劑和抗氧化劑等都可能影響ADC的穩定性。5.**避免聚集**:ADC的聚集傾向比單獨的抗體更高,因此需要采取措施減少聚集,如使用非離子表面活性劑和優化凍干工藝。
PreScissionProtease(PSP)在去除融合蛋白標簽時,對目的蛋白的純度和活性的影響通常是積極的,具體表現在以下幾個方面:1.**小化污染**:由于PSP具有高度的特異性,它在特定的肽鍵處切割,從而減少了非特異性切割可能導致的蛋白質片段,這有助于保持目的蛋白的純度。2.**減少蛋白質修飾**:PSP的特異性切割有助于避免在切割過程中對目的蛋白引入額外的修飾,如磷酸化或糖基化,這些修飾可能會影響蛋白質的活性和穩定性。3.**保持活性**:如果融合蛋白標簽的設計和切割位點選擇得當,PSP切割后的目的蛋白通常能夠保持其原有的生物活性。切割位點通常位于標簽和目的蛋白之間,這樣切割后不會在目的蛋白上留下額外的氨基酸,從而減少了對蛋白質結構和功能的影響。4.**提高純度**:PSP切割后,可以通過親和層析等方法將標簽、PSP以及未切割的融合蛋白分離,從而獲得高純度的目的蛋白。5.**便于后續分析**:去除標簽后的目的蛋白更易于進行后續的質譜分析、晶體學研究或其他生物化學分析,因為去除了可能干擾分析的標簽部分。6.**穩定性**:在某些情況下,融合蛋白的標簽可能有助于穩定目的蛋白的構象,因此在去除標簽后,需要適當處理以維持目的蛋白的穩定性。
IdeSProtease的分子改造技術主要通過以下幾個方面提高其穩定性和比活性:1.**定向進化**:利用定向進化方法,通過多輪的突變和篩選,獲得具有改善特性的酶變體。定向進化不依賴于大規模突變文庫的構建,而是通過定點突變操作,顯著提高酶分子的穩定性。2.**半理性設計與理性設計**:結合半理性設計和理性設計的方法,通過計算模擬和結構分析,對酶的三維結構進行優化,以提高其在各種環境條件下的穩定性。3.**糖基化修飾**:作為一種新的酶分子穩定性改造技術,糖基化可以提高酶的穩定性,防止酶在逆境中的失活,從而提高其在實際應用中的催化活性。4.**消除蛋白質中的不穩定性弱點**:通過分析蛋白質結構中的穩定性弱點,進行定點突變,以增強蛋白質的整體穩定性。5.**提高比活性**:通過分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的濃度下就能有效地催化反應,從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。
EndoH糖苷內切酶H(EndoH)在實驗中通常用于分析以下類型的糖鏈:1.**高甘露糖型糖鏈**:EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**某些雜合型糖鏈**:EndoH也能對某些雜合型寡聚糖的殼二糖結構進行切割,去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖。3.**N-連接糖鏈**:EndoH主要用于去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖,這有助于研究糖鏈結構和糖基化模式。4.**抗體糖型分析**:在IgG中,Fc區Asn297處的保守N-連接糖對其活性至關重要,EndoH可用于分析這些糖鏈。5.**糖蛋白的糖基化模式**:EndoH有助于分析糖蛋白的糖基化位點、糖基化程度以及糖鏈的具體結構。6.**糖鏈分析和結構表征**:在糖鏈分析的主要策略中,EndoH作為高效、準確、穩定的去糖基化方法,有助于從糖蛋白上游離糖鏈,然后進行詳細的分析表征。EndoH的使用可以為研究者提供關于糖蛋白糖基化模式的重要信息,尤其是在抗體藥物研究和開發中,對于理解糖鏈如何影響藥物的活性、穩定性和免疫原性具有重要意義。
Pfu DNA Polymerase的熱穩定性和保真性使其在優化PCR條件時更為靈活,比如在GC含量較高的模板中。Recombinant Human FGFR2 beta (IIIc) Protein,His Tag
PreScissionProtease(PSP)是一種在蛋白質純化和分析中使用的酶,具有以下特點:1.**特異性識別**:PSP能在低溫(4°C)下特異性識別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly之間進行酶切。2.**應用**:PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標簽,有助于純化目的蛋白。3.**純度高**:PSP的純度達到95%以上,確保了實驗的準確性和重復性。4.**穩定性好**:PSP在含有50%甘油的儲存緩沖液中,-80℃長期儲存,有效期2年;小量分裝-20℃保存,有效期6個月。5.**酶活定義**:在5℃條件下反應16小時,能夠切割100μg的GST標簽蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。6.**兼容性強**:PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40,10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項**:某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優化酶切效率**:建議進行預實驗摸索實驗濃度,實際操作中,建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。Recombinant Human FGFR2 beta (IIIc) Protein,His Tag
Recombinant Human NAP-2/CXCL7
Recombinant Human Coagulation factor XI Protein
Recombinant Human CDCP1 Protein
Recombinant Human FGFR2 alpha(IIIb)(hFc Tag)
Recombinant Biotinylated Mouse TNFSF15 Protein
Recombinant Cynomolgus PVRIG Protein
Recombinant Human IFN-gamma Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse MDL-1/CLEC5A Protein
Recombinant Human Epiregulin