使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,磁珠法)進行血液樣本中基因組DNA的提取,主要步驟如下:1.**實驗準備**:準備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),移液器及無菌,15ml離心管,無水乙醇,70%乙醇,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,金屬浴/水浴,臺式離心機等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,根據試劑盒要求,可能需要將血液體積調整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS緩沖液。3.**裂解血液細胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細胞裂解液,渦旋混勻后,置于金屬浴或水浴中進行裂解,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻。4.**DNA與磁珠結合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,渦旋混勻后,室溫放置一段時間,以便于基因組DNA與磁珠結合。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,小心移除上清液,去除雜質。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,進行洗滌以去除殘留的蛋白質和鹽分,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液。
BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)與其他DNA聚合酶相比,具有一些獨特的特性和優勢:1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase保留了BacillussubtilisDNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺乏5'→3'核酸外切酶結構域,這使得它具有鏈置換DNA合成的能力。這種能力對于等溫擴增技術如重組酶聚合酶擴增(RPA)和環介導等溫擴增(LAMP)非常重要,因為它可以分離雙鏈DNA,允許新的DNA鏈的合成。2.**溫度穩定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它適用于需要在較高溫度下進行的擴增反應,如RPA技術中的65°C反應條件。3.**無核酸外切酶活性**:BsuDNAPolymerase缺乏3'→5'和5'→3'核酸外切酶活性,這意味著它不會像某些其他聚合酶那樣在合成過程中具有校對功能。這可以減少非特異性擴增,提高擴增的特異性。4.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫擴增中展現出高靈敏度,能夠將微量核酸模板擴增到可檢測水平,同時保持高特異性。5.**簡化的操作流程**:與其他需要復雜操作和多個步驟的DNA聚合酶相比,BsuDNAPolymerase在等溫擴增技術中的應用簡化了操作流程,因為它不需要熱循環儀,這使得它適合現場快速檢測和診斷。
在分子生物學研究中,核酸染料是檢測DNA和RNA的重要工具。然而,傳統的溴化乙錠(EB)染料因其劇毒性和致病,逐漸被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作為一種新型的核酸染料,憑借其性能和安全性,成為科研工作者的理想選擇。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙,這是一種細胞滲透性熒光染料,能夠與核酸結合并發出熒光信號。其獨特的熒光特性使其在檢測雙鏈DNA(dsDNA)時呈現綠色熒光(530 nm),而在與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結合時則發出紅色熒光(640 nm)。這種雙重熒光特性不僅提高了檢測的靈敏度,還為研究人員提供了更豐富的信息。在瓊脂糖凝膠電泳中,GoldenView 吖啶橙核酸染料表現出與EB相當的靈敏度,能夠清晰地檢測到大片段(>1 kb)的DNA。此外,該染料的使用方法與EB完全相同,無需改變現有的實驗流程,即可輕松替換傳統染料。安全性是GoldenView 吖啶橙核酸染料的另一大優勢。與EB不同,GoldenView 經過多項致突變性試驗驗證,結果均為陰性,表明其對細胞和環境更為安全。這種低毒性特性使其在實驗室中使用更為便捷,同時降低了對研究人員健康的潛在風險。
Uracil-DNAGlycosylase(E.coli)(5U/μl):高效除PCR污染的關鍵酶在分子生物學研究中,PCR技術的應用極為廣,但PCR產物的交叉污染問題一直是影響實驗準確性和可靠性的關鍵因素之一。Uracil-DNAGlycosylase(E.coli)(UDG)作為一種高效的酶工具,憑借其獨特的性能和廣的應用,已成為解決這一問題的理想選擇。一、產品特點高效水解尿嘧啶Uracil-DNAGlycosylase(UDG)能夠特異性地催化DNA中尿嘧啶(dU)堿基與脫氧核糖之間的N-糖苷鍵水解,釋放游離尿嘧啶。這種酶對單鏈和雙鏈DNA均有效,但對RNA或長度不超過6個堿基的DNA寡核苷酸無活性。防止PCR產物污染UDG的主要應用之一是防止PCR產物的交叉污染。通過在PCR反應中使用dUTP替代dTTP,生成含有dU的PCR產物,UDG可以特異性地切割這些含有dU的DNA,從而防止其在后續反應中作為模板被擴增。反應條件兼容性UDG在pH8.0左右表現出活性,且不需要二價陽離子,可在較寬的pH范圍內工作。它對高離子強度(>200mM)敏感,因此在使用時需注意反應體系的離子濃度。牛痘DNA拓撲異構酶I具有特異性識別能力,能夠識別雙鏈DNA中的5'-(C/T)CCTT-3'序列。
一、強大的耐受性和兼容性Plant Direct PCR Master Mix (2×)(Without Dye) 使用了經過定向進化改造的DNA聚合酶,這種酶對植物樣本中的多糖、多酚等PCR抑制物具有極強的耐受性。即使在樣本經過簡單裂解后,也能高效地進行DNA擴增,適用于多種植物物種,包括擬南芥、小麥、水稻和玉米等。此外,該預混液的擴增性能好,能夠擴增長達5 kb的DNA片段,適用于各種植物樣本的直接擴增。二、快速便捷的操作流程該預混液為2倍濃度的反應體系,包含DNA聚合酶、dNTPs、Mg2?和優化的緩沖體系,只需加入模板和引物即可進行反應。其獨特的裂解緩沖液能夠在短時間內裂解植物組織,釋放出可用于PCR的基因組DNA。這種“直接擴增”的方式不僅節省了時間,還減少了因DNA提取過程中的損失和污染。三、穩定性和重復性Plant Direct PCR Master Mix (2×)(Without Dye) 經過嚴格的質量控制,即使在反復凍融50次后,活性仍保持穩定。其優化的配方和穩定的酶體系確保了實驗結果的高度重復性,適合高通量篩選和大規模樣本分析。FnCas12a的雙鏈或單鏈DNA靶標都能激發其反式剪切活性,即在形成三元復合物后,針對非特異序列ssDNA的剪切。Protein G
由于Pfu DNA Polymerase 對引物的質量要求較高,使用純度高的引物可以減少由于引物錯誤導致的非目標突變。Recombinant Protein A/G-Cys 重組蛋白A/G-Cys
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結構DNA、Holliday結構或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術導致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標效應。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結合蛋白(MBP)和T7核酸內切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業上使用時成本較高,但它在大規模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術的應用中。Recombinant Protein A/G-Cys 重組蛋白A/G-Cys
Recombinant Human NAP-2/CXCL7
Recombinant Human Coagulation factor XI Protein
Recombinant Human CDCP1 Protein
Recombinant Human FGFR2 alpha(IIIb)(hFc Tag)
Recombinant Biotinylated Mouse TNFSF15 Protein
Recombinant Cynomolgus PVRIG Protein
Recombinant Human IFN-gamma Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse MDL-1/CLEC5A Protein
Recombinant Human Epiregulin