Genvis測試去除唾液酸以揭示電荷變體:唾液酸是帶負電荷的糖殘基,存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會使分析工作流程復雜化,從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 樣品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白質中的潛在變體。該應用展示了一種快速簡便的樣品制備方法,可在電荷異構體分析之前去除所有唾液酸。GalNAcEXO 酶來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為52 kDa。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發
在抗體藥物及核酸藥物領域,倍篤生物產品線涵蓋藥物研發的全流程,主要用——RNA轉染試劑、生物活性物質純化分離用填料產品、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德國BASF、美國QED、中國君研生物、中國金傳生物、中國毫厘科技、中國再帆生物等。這些國產品牌都具有國內自研、自產能力,批次生產穩定可靠、品質可控,為行業發展提供更多國產選擇。遼寧固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶PNGase F酶在大腸桿菌中表達,該重組基因來源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。
由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較,相同材料的標準胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。
使用Genovis的OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析:依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區域。將依那西普與OpeRAT一起孵育,并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促紅xibao生成素 (EPO) 是一種具有單個 O-糖基化位點的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO進行去唾液酸化后,用OpeRAT消化天然蛋白,并通過反相LC-MS分析所得蛋白質片段。O-糖基化的位點可以通過識別OeRATOR消化位點直接推斷出來。為了獲得良好性能,需要去除唾液酸助劑,因此購買中包括2000個單位(如果SialEXO凍干)。1. 用于方法開發的靈活產品形式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的,而該酶在N-聚糖上沒有活性。OpeRATOR和SialEXO處理后,O-糖基化蛋白被消化成攜帶O-聚糖的肽。消化發生在O-糖基化位點的N端。兩種酶都含有 His 標簽,酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。
SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白,在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。該酶具有 His 標簽,分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不會被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并釋放出聚糖。效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。FucosEXO 可在 1 至 2 小時內水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 。遼寧固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶
GalNAcEXO 在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內具有高度活性,來源于Akkermansia muciniphila。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發
GlycOCATCH設計用于特異性結合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶,該酶經過工程設計,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。 結合在pH 5-8的生理緩沖液中進行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用,可以用8M尿素進行洗脫。或者,可以使用活性OpeRATOR酶進行洗脫,該酶消化O-聚糖位點的N末端結合的O-糖蛋白。在后一種情況下,肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發