G0F 抗體在 30 分鐘內(nèi)：半乳糖的存在會影響zhiliao性抗體引發(fā)的效應(yīng)功能，為了研究抗體的作用方式，可能需要徹底去除半乳糖殘留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠單抗上使用 30 分鐘孵育證明。genovis的GalactEXO Immobilized 由強大的 GalactEXO 酶組成，該酶固定在瓊脂糖珠上，并以易于使用的微離心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖殘基。使用FabRICATOR?將抗體消化成亞基，并使用LC-MS進(jìn)行分析。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉(zhuǎn)變，但后者在z終制劑中沒有留下酶。沒有任何半乳糖基化結(jié)構(gòu)表明半乳糖殘基完全水解，因此LC-MS數(shù)據(jù)中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。沒有任何半乳糖基化結(jié)構(gòu)表明半乳糖殘基完全水解，因此LC-MS數(shù)據(jù)中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc（稱為 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解。青海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

該酶適用于在釋放的聚糖結(jié)構(gòu)上修剪半乳糖，用于外切糖苷酶陣列，或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖譜的抗體。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-連接的半乳糖；2. 有助于在亞基水平上識別糖基化修飾；3. 可固定在即用型離心柱中。Genovis的GalactEXO是一種外切糖苷酶，含有β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖殘基。該混合物由兩種半乳糖苷酶組成，可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。重慶凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO對α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活性。

我們展示了使用兩種蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一種 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受體的胞外結(jié)構(gòu)域。該結(jié)構(gòu)域用 2 個 N-糖和 8-11 個 1 個具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修飾。在 37°C 下將這種重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中級 LC-MS 分析所示。促紅xibao生成素 （EPO） 是一種攜帶 3 個 N-聚糖和 1 個he心 1 個 O-聚糖的小蛋白質(zhì)，其總質(zhì)量的近 40% 由聚糖組成。O-連接聚糖通常存在于蛋白質(zhì)的暴露位置，因為它們在蛋白質(zhì)折疊發(fā)生后附著。只有負(fù)責(zé)其合成的糖基轉(zhuǎn)移酶才能接觸到這些暴露的位點。

糖蛋白性能測試：O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用這種復(fù)雜的聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性，需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO，這些蛋白攜帶多達(dá)11個O-聚糖，這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進(jìn)行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內(nèi)對所有三種 TNFR 蛋白進(jìn)行去巖藻糖磺酸處理，而用其他巖藻糖酶處理導(dǎo)致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。

從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖：Genovis的GalactEXO Immobilized 對 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性，這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中，例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘，并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導(dǎo)致N-連接和O-連接聚糖上的半乳糖殘基水解，這在半乳糖基化物種中被視為信號丟失。對游離的N-聚糖分析證實了LC-MS數(shù)據(jù)。OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。北京瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

依那西普是一種 Fc 融合蛋白，具有高度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。青海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

OglyZOR 來源于口腔鏈球菌，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 227 kDa。SialEXO來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達(dá)。SialEXO酶含有His標(biāo)簽，組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶；2. 降低樣品異質(zhì)性，揭示潛在的關(guān)鍵蛋白質(zhì)修飾；3. 完全、穩(wěn)健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶，用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發(fā)揮作用，因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。青海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis