Genovis的SialEXO Immobilized是一種微離心柱，用于在室溫下孵育30分鐘后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。為了研究依那西普的潛在電荷變體，開發了一種使用SialEXO固定化柱對糖蛋白進行去唾液酸化的一般工作流程。毛細管電泳通常用于在生物制劑的表征和質量控制過程中確定電荷變體。使用SialEXO Imfixedized對糖蛋白進行去唾液酸化，并使用ProteinSimple的Maurice在成像等電聚焦中進行分析。綜合起來，該分析工作流程改進了糖蛋白的分離并實現了電荷異構體分析。依那西普，如果不首先去除唾液酸，將很難分析，但使用SialEXO固定化分離峰可以獲得。實現 O-糖譜分析、位點占用測定和 O-糖肽圖譜以及使用 LC-MS 分析的中級方法。四川瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶

α連接的Genovis的GalNAcs的水解：GalNAcEXO 是一種 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶，可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 殘基。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc（稱為 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解，并且該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAcs 上顯示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一種外α-N-乙酰半乳糖胺酶，用于有效水解與糖蛋白（Tn 抗原）中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 （GalNAc）。該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAc 上顯示活性。GalNAcEXO 在天然條件下水解糖蛋白上的 GalNAc，在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內具有高度活性。云南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究FucosEXO 可在 1 至 2 小時內水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 。

Genovis的SialEXO固定化用于復雜糖蛋白的去唾液酸化：在設置反應條件時，需要在所需的反應時間和完成反應所需的酶量之間進行權衡。較高的酶量可保證在更短的時間內完成周轉，但會使下游分析復雜化。為了避免此類問題，我們以離心柱形式固定了活性SialEXO。這允許以更短的孵育時間孵育具有明顯更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。這種糖蛋白是一種具有挑戰性的底物，具有 6 個 N- 和多達 26 個 O-聚糖，由 α2,3 和 α2,6 連接的唾液酸修飾。對游離的N-聚糖的分析表明，SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化，SialEXO固定化。

Genvois的SialEXO產品是唾液酸酶，用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成，每種唾液酸酶都具有獨特的活性，并且它們同時起作用。一種酶對α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性，另一種酶（SialEXO 2-3）通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時內去除天然蛋白質上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白，在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。兩種酶都含有 His 標簽，酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖結構表征。

Core 1型O-聚糖的水解：O-糖基化不僅難以研究，其自然異質性也會導致其他分析出現問題。例如，由于樣品中存在許多不同的糖型，因此對完整或中等水平的重糖基化蛋白質進行質譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經存在多年，Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰性，現有的O-糖釋放化學方法通常會導致蛋白質發生重大修飾，因此不太適合下游分析。1. 用于方法開發的靈活產品形式；2. 可以結合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。云南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

GalNAcEXO 酶來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達，帶有His標簽，分子量為52 kDa。四川瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶

Fc N-聚糖在抗體的效應功能中起著至關重要的作用，但可能會增加蛋白質表征測定的復雜性。在天然條件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結構。 為了證明PNGase F固定化和PNGase F凍干在天然反應條件下有效去除Fc N-聚糖，對zhiliao性抗體曲妥珠單抗進行了處理。圖2中的質量數偏移表明，在37°C下用Genovis的PNGase F凍干或PNGase F固定化孵育1小時后，曲妥珠單抗上的Fc N-聚糖成功去除，與在溶液中用PNGase F凍干處理的樣品相比，沒有酶干擾用PNGase F固定處理的樣品的分析。四川瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶