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黑龍江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

來源: 發布時間:2024年11月20日

Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不僅難以研究,其自然異質性也會導致其他分析出現問題。例如,由于樣品中存在許多不同的糖型,因此對完整或中等水平的重糖基化蛋白質進行質譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經存在多年,Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰性,現有的O-糖釋放化學方法通常會導致蛋白質發生重大修飾,因此不太適合下游分析。1. 用于方法開發的靈活產品形式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。應用:降低樣品復雜性、電荷異構體分析和外切糖苷酶陣列。黑龍江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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Genvis測試去除唾液酸以揭示電荷變體:唾液酸是帶負電荷的糖殘基,存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會使分析工作流程復雜化,從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 樣品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白質中的潛在變體。該應用展示了一種快速簡便的樣品制備方法,可在電荷異構體分析之前去除所有唾液酸。湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisSialEXO 2-3唾液酸酶,對 α2-3連接的唾液酸靶向水解。

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ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴性蛋白酶,可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端,包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的,該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基,也不會在糖蛋白的N-糖基化位點。該酶接受 O-聚糖結構,包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結構以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。

Genovis 集團由瑞典 Genovis AB 和美國全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達克北方增長市場上市。如需了解更多信息,請訪問投資者關系。 Genovis的經營理念是為生物制藥和研究行業的客戶提供工具,以促進和節省開發新治療方法和診斷的時間。Genovis 酶產品,稱為 SmartEnzymes,被世界各地的科學家使用,創新的產品形式促進了生物藥物的開發和質量控制。 通過在2020年收購QED Bioscience,產品組合已擴大到包括用于研究、生物藥物開發和診斷檢測的抗體和試劑。在 網站 上閱讀有關QED的更多信息 Genovis 研發活動的基石是客戶關系,使產品開發能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開發新工作流程和新靶點抗體的學術團體的合作同樣有價值??梢杂?M尿素進行洗脫;或使用活性OpeRATOR酶進行洗脫。

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使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征:未成熟的截短O-聚糖導致了復雜生物制藥的異質性,使其分析更具挑戰性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成,通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接,稱為Tn抗原。 現在,使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質譜圖中可以觀察到重復峰的模式。其次,在與GalNAcEXO酶孵育后,剩余的GalNAc殘基被完全去除,留下一個峰。因此,該工作流程確認了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原,并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質性,這有助于確認蛋白質的完整質量,并揭示截短的片段。親和純化微離心柱,SialEXO 凍干 200 單位,OpeRATOR 凍干 200 單位。高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分:PNGase?F;O-糖苷酶。黑龍江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

Genovis的SialEXO固定化用于復雜糖蛋白的去唾液酸化:在設置反應條件時,需要在所需的反應時間和完成反應所需的酶量之間進行權衡。較高的酶量可保證在更短的時間內完成周轉,但會使下游分析復雜化。為了避免此類問題,我們以離心柱形式固定了活性SialEXO。這允許以更短的孵育時間孵育具有明顯更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。這種糖蛋白是一種具有挑戰性的底物,具有 6 個 N- 和多達 26 個 O-聚糖,由 α2,3 和 α2,6 連接的唾液酸修飾。對游離的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化,SialEXO固定化。黑龍江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

標簽: 中鹽核酸酶
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