Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不僅難以研究,其自然異質性也會導致其他分析出現問題。例如,由于樣品中存在許多不同的糖型,因此對完整或中等水平的重糖基化蛋白質進行質譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經存在多年,Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰性,現有的O-糖釋放化學方法通常會導致蛋白質發生重大修飾,因此不太適合下游分析。1. 用于方法開發的靈活產品形式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。IgA 特異性O-糖肽富集:胰蛋白酶消化IgA。山西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究
使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征:未成熟的截短O-聚糖導致了復雜生物制藥的異質性,使其分析更具挑戰性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成,通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接,稱為Tn抗原。 現在,使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質譜圖中可以觀察到重復峰的模式。其次,在與GalNAcEXO酶孵育后,剩余的GalNAc殘基被完全去除,留下一個峰。因此,該工作流程確認了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原,并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質性,這有助于確認蛋白質的完整質量,并揭示截短的片段。山西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的GalactEXO酶。
經過多年的經驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產品、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、美國QED、中國君研生物等。
Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動物天冬酰胺連接復合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應過程中,從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無損,可用于進一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備,以降低蛋白質的異質性,使游離的糖分析成為可能,并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達,該重組基因來源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產。 mAb1被糖基化,主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響:可使用Genovis的IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶。
GlycOCATCH用于純化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于無活性的Genovis的OpeRATOR?酶,該酶經過工程改造,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特異性富集;2. 可靠 - 高親和力結合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要輔助因子或特殊緩沖液。GalNAcEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為52 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程; 4. 即用型 - 只需加水即可!用于水解糖蛋白上GalNAc殘基的凍干酶。Genovis的GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。依那西普的磷性能測試?:PNGaseF去除N-聚糖。山西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究
用于LC-MS分析之前制備樣品,以鑒定其他PTM或確認氨基酸序列。山西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究
在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截斷O-聚糖后,在質譜圖中觀察到幾個與GalNAcs相關的峰。為了去除剩余的GalNAc殘基,應用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO處理后觀察到的單個蛋白峰顯示完全去除剩余的GalNAcs。?GalNAcEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性,使其與大多數樣品相容。此外,GalNAcEXO的活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子,如BSA。根據底物的性質,糖蛋白的GalNAcEXO反應在2小時內完成,而更復雜的樣品可能需要孵育過夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在離心柱中,以便快速方便地處理樣品,在制備過程中不會殘留酶。山西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究