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湖南PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

來源: 發布時間:2024年08月02日

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力,用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖,以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時,西妥昔單抗的所有N-聚糖(包括Fab-聚糖)在PNGase F固定化10分鐘內完全去除,PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下,PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件,將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化,分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。用于糖蛋白的去氟糖基化,而不會用酶污染z終制劑。湖南PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

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為了研究 OglyZOR 對天然糖蛋白的活性,將該酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒有 SialEXO 孵育 1 小時。當唾液酸被去除時,OglyZOR酶有效地水解了所有三種底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 (Gal-β1,3-GalNAc)。這使得這些酶適合在LC-MS分析之前制備樣品,以鑒定其他PTM或確認氨基酸序列O-糖基化生物制藥的全去糖基化:O-糖基化生物制藥(如依那西普)很難表征。為了能夠通過質譜法測定完整質量數,我們進行了酶促總去糖基化。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解,而O-聚糖可以與OglyZOR和SialEXO一起去除。。北京瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究GalNAcEXO 用于有效水解與糖蛋白(Tn 抗原)中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)。

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GlycOCATCH設計用于特異性結合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶,該酶經過工程設計,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。 結合在pH 5-8的生理緩沖液中進行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用,可以用8M尿素進行洗脫?;蛘撸梢允褂没钚設peRATOR酶進行洗脫,該酶消化O-聚糖位點的N末端結合的O-糖蛋白。在后一種情況下,肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。

上海倍篤生物科技有限公司(簡稱“倍篤生物”),由中國科學院及生物醫藥產業界人士,于2018年1月共同創立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相關法規要求,如cGMP規范、ISO13485質量管理體系認證等,致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發等,藥物研發領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規、高質量物料及專業服務,以期與客戶共同協作,加快研發及生產進度,為客戶提供更多價值。GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。

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Genvis測試去除唾液酸以揭示電荷變體:唾液酸是帶負電荷的糖殘基,存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會使分析工作流程復雜化,從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 樣品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白質中的潛在變體。該應用展示了一種快速簡便的樣品制備方法,可在電荷異構體分析之前去除所有唾液酸。OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化攜帶he心 1 O-聚糖的蛋白質,糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 殘基的 N 端。北京瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

對游離的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化。湖南PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白,在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。該酶具有 His 標簽,分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不會被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并釋放出聚糖。效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。湖南PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

標簽: 中鹽核酸酶
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