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重慶PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

來源: 發(fā)布時間:2024年08月09日

與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖:糖基化往往是異質(zhì)的,這使得對高度糖基化的生物zhiliao藥物的分析具有挑戰(zhàn)性。完整質(zhì)量數(shù)的確認(rèn)以及其他產(chǎn)品質(zhì)量屬性的表征受到不同糖型復(fù)雜性的阻礙,這就是為什么有效的聚糖去除工具簡化了此類分析的原因。 雖然 N-聚糖包含一個共同的結(jié)構(gòu),并且可以通過 PNGase F 整體去除,但粘蛋白型 O-聚糖在結(jié)構(gòu)上更加多樣化,具有多個不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物,能夠依次分解O-聚糖,以完全去除最常見的O-聚糖結(jié)構(gòu)(二唾液酸和單唾液酸基he心1和Tn抗原)。生物制劑的表征和質(zhì)量控制過程中確定電荷變體;重慶PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

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Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖;2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心;3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。安徽PNGaseF去糖基化酶使用OpeRATOR進(jìn)行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶。

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GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達(dá)。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標(biāo)簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式;2. 可以結(jié)合酶以提高效率; 3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!將混合物加載到GlycOCATCH上,洗滌樹脂,并用8M尿素洗脫結(jié)合的肽。純化后,在RP-LC-MS上分離樣品。數(shù)據(jù)顯示,糖苷酸肽的選擇性純化,攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集:IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。胰蛋白酶消化IgA后,將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上,并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預(yù)期的 O-糖基化鉸鏈肽富集,具有不同程度的糖基化。

糖蛋白性能測試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用這種復(fù)雜的聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性,需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO,這些蛋白攜帶多達(dá)11個O-聚糖,這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進(jìn)行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內(nèi)對所有三種 TNFR 蛋白進(jìn)行去巖藻糖磺酸處理,而用其他巖藻糖酶處理導(dǎo)致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc(稱為 Tn 抗原)被 GalNAcEXO 快速有效地水解。

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GlycOCATCH設(shè)計用于特異性結(jié)合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶,該酶經(jīng)過工程設(shè)計,可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。 結(jié)合在pH 5-8的生理緩沖液中進(jìn)行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強(qiáng)相互作用,可以用8M尿素進(jìn)行洗脫。或者,可以使用活性O(shè)peRATOR酶進(jìn)行洗脫,該酶消化O-聚糖位點的N末端結(jié)合的O-糖蛋白。在后一種情況下,肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結(jié)合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。曲妥珠單抗Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結(jié)構(gòu)。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶用于確認(rèn)O-糖的存在和降低樣品的異質(zhì)性。重慶PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認(rèn)依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù),進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。標(biāo)記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具,可降低樣品異質(zhì)性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實現(xiàn)完全糖基去除,以改善蛋白質(zhì)表征;3. 可固定在即用型離心柱中。重慶PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

標(biāo)簽: 中鹽核酸酶
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