Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖：依那西普是一種融合蛋白，由TNF受體的胞外結構域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質在Fc區域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇，使其成為一種非常難以在結構上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性，制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品：（i）攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結構混合物的未經處理的糖蛋白，（ii）用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產生裸核1結構，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產生單個GalNAc殘基， 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應中處理三個樣品（圖1）。作為比較，SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應中，以將Fc區與大多數C端糖肽分離，以促進其表征。使用 GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征。河南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

Genovis 集團由瑞典 Genovis AB 和美國全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達克北方增長市場上市。如需了解更多信息，請訪問投資者關系。 Genovis的經營理念是為生物制藥和研究行業的客戶提供工具，以促進和節省開發新治療方法和診斷的時間。Genovis 酶產品，稱為 SmartEnzymes，被世界各地的科學家使用，創新的產品形式促進了生物藥物的開發和質量控制。 通過在2020年收購QED Bioscience，產品組合已擴大到包括用于研究、生物藥物開發和診斷檢測的抗體和試劑。在 網站 上閱讀有關QED的更多信息 Genovis 研發活動的基石是客戶關系，使產品開發能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開發新工作流程和新靶點抗體的學術團體的合作同樣有價值。天津固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。

α連接的Genovis的GalNAcs的水解：GalNAcEXO 是一種 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶，可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 殘基。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc（稱為 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解，并且該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAcs 上顯示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一種外α-N-乙酰半乳糖胺酶，用于有效水解與糖蛋白（Tn 抗原）中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 （GalNAc）。該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAc 上顯示活性。GalNAcEXO 在天然條件下水解糖蛋白上的 GalNAc，在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內具有高度活性。

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內完全去除，PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下，PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件，將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。實現 O-糖譜分析、位點占用測定和 O-糖肽圖譜以及使用 LC-MS 分析的中級方法。

我們展示了使用兩種蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一種 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受體的胞外結構域。該結構域用 2 個 N-糖和 8-11 個 1 個具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修飾。在 37°C 下將這種重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中級 LC-MS 分析所示。促紅xibao生成素 （EPO） 是一種攜帶 3 個 N-聚糖和 1 個he心 1 個 O-聚糖的小蛋白質，其總質量的近 40% 由聚糖組成。O-連接聚糖通常存在于蛋白質的暴露位置，因為它們在蛋白質折疊發生后附著。只有負責其合成的糖基轉移酶才能接觸到這些暴露的位點。采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。黑龍江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶

GalNAcEXO酶是可降低樣品異質性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復雜 O-糖蛋白。河南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

Fc N-聚糖在抗體的效應功能中起著至關重要的作用，但可能會增加蛋白質表征測定的復雜性。在天然條件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結構。 為了證明PNGase F固定化和PNGase F凍干在天然反應條件下有效去除Fc N-聚糖，對zhiliao性抗體曲妥珠單抗進行了處理。圖2中的質量數偏移表明，在37°C下用Genovis的PNGase F凍干或PNGase F固定化孵育1小時后，曲妥珠單抗上的Fc N-聚糖成功去除，與在溶液中用PNGase F凍干處理的樣品相比，沒有酶干擾用PNGase F固定處理的樣品的分析。河南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發