FucosEXO中的酶在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然條件下水解糖蛋白上的巖藻糖,在6至8的pH值范圍內顯示出高活性,無需輔助因子或添加劑。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集:GlycOCATCH還可用于從復雜的樣品混合物(如人血清)中選擇性富集O-糖基化蛋白。簡而言之,用Genovis的SialEXO處理血清并應用于GlycOCATCH樹脂。洗滌樹脂,用8M尿素洗脫O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化樣品并使用 RP-LC-MS/MS 進行分析,并使用 Swiss Prot 數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質列表。O-糖基化蛋白以黃色表示。GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物,可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。浙江PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究
Genovis的PNGase F Automation 含有以自動化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。它能夠實現(xiàn)高通量 N-糖去除,從而簡化一系列糖蛋白底物的下游分析。根據(jù)您的工作流程要求和樣品可用性。PNGase F Automation 可在 96 孔板中凍干,用于 96 x 5 μg 或 96 x 50 μg 糖蛋白上的 N-糖自動水解。1. 實現(xiàn)自動化高通量樣品處理;2. 可同時消解多達 96 個樣品;3. 兩種選擇可用于不同樣品量的消解;4. 即用型 - 只需添加您的樣品即可。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽(包括唾液酸化O-聚糖)的凍干酶。Genovis的ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式;2.以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!陜西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究復雜樣品的特異性凈化;改進 MS 分析的樣品制備。
與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括:OmniGlyZOR 微離心柱;PNGase F 凍干;RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性,否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化:對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白,OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。
糖蛋白性能測試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結構。分析用這種復雜的聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性,需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO,這些蛋白攜帶多達11個O-聚糖,這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內對所有三種 TNFR 蛋白進行去巖藻糖磺酸處理,而用其他巖藻糖酶處理導致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。生物制劑的表征和質量控制過程中確定電荷變體;
genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù),進行了釋放的N-聚糖分析。標記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具,可降低樣品異質性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實現(xiàn)完全糖基去除,以改善蛋白質表征;3. 可固定在即用型離心柱中。將OglyZOR酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒有 SialEXO 孵育 1 小時。浙江PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究
而不會用酶污染z終制劑,可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。浙江PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究
Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖:依那西普是一種融合蛋白,由TNF受體的胞外結構域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質在Fc區(qū)域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇,使其成為一種非常難以在結構上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性,制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品:(i)攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結構混合物的未經(jīng)處理的糖蛋白,(ii)用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產(chǎn)生裸核1結構,以及(iii)用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產(chǎn)生單個GalNAc殘基, 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應中處理三個樣品(圖1)。作為比較,SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應中,以將Fc區(qū)與大多數(shù)C端糖肽分離,以促進其表征。浙江PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究