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上海用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

來源: 發布時間:2024年09月11日

SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白,在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。該酶具有 His 標簽,分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不會被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并釋放出聚糖。效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。使用OpeRATOR對胞生成素(EPO)進行O-糖位點特異性消化:確定中級水平的 O-糖基化位點。上海用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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genovis的FucosEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性,使其與大多數樣品相容。此外,FucosEXO活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子,如BSA。根據底物的性質,FucosEXO 可在 1 至 2 小時內水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 連接的巖藻糖殘基,而對于非常復雜的樣品可能需要更長的孵育時間。FucoseEXO也可固定在離心柱中,可快速方便地處理高達0.5mg的糖蛋白。使用離心柱形式,將糖蛋白樣品與固定化的FucosEXO樹脂一起孵育,然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。湖南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶PNGase F 以凍干粉的形式提供,裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中,分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。

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ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴性蛋白酶,可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端,包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的,該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基,也不會在糖蛋白的N-糖基化位點。該酶接受 O-聚糖結構,包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結構以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。

Genovis的SialEXO Immobilized是一種微離心柱,用于在室溫下孵育30分鐘后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。為了研究依那西普的潛在電荷變體,開發了一種使用SialEXO固定化柱對糖蛋白進行去唾液酸化的一般工作流程。毛細管電泳通常用于在生物制劑的表征和質量控制過程中確定電荷變體。使用SialEXO Imfixedized對糖蛋白進行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等電聚焦中進行分析。綜合起來,該分析工作流程改進了糖蛋白的分離并實現了電荷異構體分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,將很難分析,但使用SialEXO固定化分離峰可以獲得。ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。

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GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率; 3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!將混合物加載到GlycOCATCH上,洗滌樹脂,并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后,在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示,糖苷酸肽的選擇性純化,攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集:IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后,將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上,并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集,具有不同程度的糖基化。FucosEXO 在1小時內對所有三種 TNFR 蛋白去巖藻糖磺酸處理。湖南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

將OglyZOR酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒有 SialEXO 孵育 1 小時。上海用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動物天冬酰胺連接復合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應過程中,從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無損,可用于進一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備,以降低蛋白質的異質性,使游離的糖分析成為可能,并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達,該重組基因來源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產。 mAb1被糖基化,主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。上海用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

標簽: 中鹽核酸酶
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